华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2010年
2期
171-174,188
,共5页
周婷%王世宣%翁丹卉%卢运萍%马丁
週婷%王世宣%翁丹卉%盧運萍%馬丁
주정%왕세선%옹단훼%로운평%마정
Bub1基因%紫杉醇%耐药%卵巢癌%SKOV3细胞
Bub1基因%紫杉醇%耐藥%卵巢癌%SKOV3細胞
Bub1기인%자삼순%내약%란소암%SKOV3세포
目的 构建人Bub1 shRNA真核表达质粒,鉴定该质粒对人卵巢癌SKOV3细胞中Bub1基因的抑制作用,并探讨其对SKOV3细胞紫杉醇敏感性的影响.方法 构建pEGFP-Bub1-shRNA质粒,将其经脂质体Lipo 2000TM转染SKOV3细胞后,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法比较转染前后SKOV3细胞的紫杉醇敏感性.结果 成功构建了pEGFP-Bub1-shRNA质粒;RT-PCR 和Western blot检测结果提示,转染后Bub1的mRNA和蛋白表达均显著降低;MTT和FACS提示,与对照组细胞相比,转染后SKOV3细胞生长抑制率及凋亡率明显降低(P<0.05).结论 pEGFP-Bub1-shRNA质粒能有效抑制Bub1 mRNA及蛋白的表达,并降低SKOV3细胞紫杉醇敏感性,该质粒的成功构建为进一步研究Bub1基因的生物学功能提供了工具.
目的 構建人Bub1 shRNA真覈錶達質粒,鑒定該質粒對人卵巢癌SKOV3細胞中Bub1基因的抑製作用,併探討其對SKOV3細胞紫杉醇敏感性的影響.方法 構建pEGFP-Bub1-shRNA質粒,將其經脂質體Lipo 2000TM轉染SKOV3細胞後,通過RT-PCR及Western blot檢測榦擾效率,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,MTT法比較轉染前後SKOV3細胞的紫杉醇敏感性.結果 成功構建瞭pEGFP-Bub1-shRNA質粒;RT-PCR 和Western blot檢測結果提示,轉染後Bub1的mRNA和蛋白錶達均顯著降低;MTT和FACS提示,與對照組細胞相比,轉染後SKOV3細胞生長抑製率及凋亡率明顯降低(P<0.05).結論 pEGFP-Bub1-shRNA質粒能有效抑製Bub1 mRNA及蛋白的錶達,併降低SKOV3細胞紫杉醇敏感性,該質粒的成功構建為進一步研究Bub1基因的生物學功能提供瞭工具.
목적 구건인Bub1 shRNA진핵표체질립,감정해질립대인란소암SKOV3세포중Bub1기인적억제작용,병탐토기대SKOV3세포자삼순민감성적영향.방법 구건pEGFP-Bub1-shRNA질립,장기경지질체Lipo 2000TM전염SKOV3세포후,통과RT-PCR급Western blot검측간우효솔,류식세포의검측세포조망솔,MTT법비교전염전후SKOV3세포적자삼순민감성.결과 성공구건료pEGFP-Bub1-shRNA질립;RT-PCR 화Western blot검측결과제시,전염후Bub1적mRNA화단백표체균현저강저;MTT화FACS제시,여대조조세포상비,전염후SKOV3세포생장억제솔급조망솔명현강저(P<0.05).결론 pEGFP-Bub1-shRNA질립능유효억제Bub1 mRNA급단백적표체,병강저SKOV3세포자삼순민감성,해질립적성공구건위진일보연구Bub1기인적생물학공능제공료공구.
