食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2010年
19期
283-287
,共5页
罗翠红%王弘%刘细霞%沈玉栋%孙远明%黄佳佳%张宏斌
囉翠紅%王弘%劉細霞%瀋玉棟%孫遠明%黃佳佳%張宏斌
라취홍%왕홍%류세하%침옥동%손원명%황가가%장굉빈
抗吠喃它酮代谢物的衍生物%单链抗体%噬菌体展示%序列分析
抗吠喃它酮代謝物的衍生物%單鏈抗體%噬菌體展示%序列分析
항폐남타동대사물적연생물%단련항체%서균체전시%서렬분석
目的:构建抗吠喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库.方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL).经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(Gly4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(ScFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库.随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序.登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对.结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,Vn序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上.结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考.
目的:構建抗吠喃它酮代謝物(AMOZ)的衍生物噬菌體單鏈抗體庫.方法:從分泌抗AMOZ的單剋隆抗體的雜交瘤細胞繫(BC3-E8)中提取總RNA,經RT-PCR反轉錄成cDNA,設計通用簡併引物,PCR擴增抗體重鏈可變區基因(VH)和輕鏈可變區基因(VL).經重疊延伸PCR(SOE-PCR),將VH和VL基因用編碼(Gly4Ser)3的linker隨機拼接成單鏈抗體(ScFv)基因,然後將其剋隆到噬菌粒載體pCANTAB5E中,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)TG1感受態細胞,經輔助噬菌體M13K07超感染,建立噬菌體單鏈抗體庫.隨機挑取10箇暘性剋隆,經PCR和雙酶切鑒定,併測序.登陸DNAMAN軟件對序列進行分析、比對.結果:成功擴增VH、VL及scFv基因,併得到庫容為1.2×106的噬菌體抗體庫,噬菌體的滴度為2.0×1010PFU,PCR鑒定及雙酶切鑒定文庫重組率較高,軟件對序列比對結果顯示,scFv基因全長序列之間差異為8.38%,Vn序列差異為3.68%,VL序列差異為14.34%,且序列差異多集中在CDR抗原結閤區域對應的覈痠序列上.結論:已構建抗呋喃它酮代謝物的衍生物噬菌體單鏈抗體庫,為進一步富集篩選併錶達抗AMOZ的衍生物的單鏈抗體提供參攷.
목적:구건항폐남타동대사물(AMOZ)적연생물서균체단련항체고.방법:종분비항AMOZ적단극륭항체적잡교류세포계(BC3-E8)중제취총RNA,경RT-PCR반전록성cDNA,설계통용간병인물,PCR확증항체중련가변구기인(VH)화경련가변구기인(VL).경중첩연신PCR(SOE-PCR),장VH화VL기인용편마(Gly4Ser)3적linker수궤병접성단련항체(ScFv)기인,연후장기극륭도서균립재체pCANTAB5E중,전화대장간균(Escherichia coli)TG1감수태세포,경보조서균체M13K07초감염,건립서균체단련항체고.수궤도취10개양성극륭,경PCR화쌍매절감정,병측서.등륙DNAMAN연건대서렬진행분석、비대.결과:성공확증VH、VL급scFv기인,병득도고용위1.2×106적서균체항체고,서균체적적도위2.0×1010PFU,PCR감정급쌍매절감정문고중조솔교고,연건대서렬비대결과현시,scFv기인전장서렬지간차이위8.38%,Vn서렬차이위3.68%,VL서렬차이위14.34%,차서렬차이다집중재CDR항원결합구역대응적핵산서렬상.결론:이구건항부남타동대사물적연생물서균체단련항체고,위진일보부집사선병표체항AMOZ적연생물적단련항체제공삼고.
