暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
6期
555-559
,共5页
朱丽红%毕伟%陆大祥%谭宇蕙%杜标炎%李杰芬
硃麗紅%畢偉%陸大祥%譚宇蕙%杜標炎%李傑芬
주려홍%필위%륙대상%담우혜%두표염%리걸분
不可降解CyclinB1%细胞周期蛋白%绿色荧光蛋白%细胞周期%肿瘤
不可降解CyclinB1%細胞週期蛋白%綠色熒光蛋白%細胞週期%腫瘤
불가강해CyclinB1%세포주기단백%록색형광단백%세포주기%종류
目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并观察其在人胃癌细胞SGC-7901中的表达及对SGC-7901活性的影响.方法:通过RT-PCR法扩增不可降解CyclinB1(ND CyclinB1),将其插入到pEGFP-N1载体的XhoⅠ和BamHⅠ酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并以PCR、双酶切、测序鉴定.通过脂质体法转染胃癌细胞SGC-7901,进行荧光检测、Western blotting分析和流式细胞仪分析.结果:PCR、酶切及测序证明重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1构建成功.转染胃癌细胞SGC-7901 24 h后,荧光显微镜下观察到绿色荧光.Western blotting检测到CyclinB1的表达明显增加.流式细胞仪检测重组质粒细胞组凋亡指数高于对照组,差异有显著性.结论:成功构建pEGFP-N1-ND CyclinB1荧光真核表达载体,并可在SGC-7901细胞中有效表达.
目的:構建真覈錶達載體pEGFP-N1-ND CyclinB1,併觀察其在人胃癌細胞SGC-7901中的錶達及對SGC-7901活性的影響.方法:通過RT-PCR法擴增不可降解CyclinB1(ND CyclinB1),將其插入到pEGFP-N1載體的XhoⅠ和BamHⅠ酶切位點,構建真覈錶達載體pEGFP-N1-ND CyclinB1,併以PCR、雙酶切、測序鑒定.通過脂質體法轉染胃癌細胞SGC-7901,進行熒光檢測、Western blotting分析和流式細胞儀分析.結果:PCR、酶切及測序證明重組質粒pEGFP-N1-ND CyclinB1構建成功.轉染胃癌細胞SGC-7901 24 h後,熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光.Western blotting檢測到CyclinB1的錶達明顯增加.流式細胞儀檢測重組質粒細胞組凋亡指數高于對照組,差異有顯著性.結論:成功構建pEGFP-N1-ND CyclinB1熒光真覈錶達載體,併可在SGC-7901細胞中有效錶達.
목적:구건진핵표체재체pEGFP-N1-ND CyclinB1,병관찰기재인위암세포SGC-7901중적표체급대SGC-7901활성적영향.방법:통과RT-PCR법확증불가강해CyclinB1(ND CyclinB1),장기삽입도pEGFP-N1재체적XhoⅠ화BamHⅠ매절위점,구건진핵표체재체pEGFP-N1-ND CyclinB1,병이PCR、쌍매절、측서감정.통과지질체법전염위암세포SGC-7901,진행형광검측、Western blotting분석화류식세포의분석.결과:PCR、매절급측서증명중조질립pEGFP-N1-ND CyclinB1구건성공.전염위암세포SGC-7901 24 h후,형광현미경하관찰도록색형광.Western blotting검측도CyclinB1적표체명현증가.류식세포의검측중조질립세포조조망지수고우대조조,차이유현저성.결론:성공구건pEGFP-N1-ND CyclinB1형광진핵표체재체,병가재SGC-7901세포중유효표체.
