暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
6期
544-549
,共6页
风疹E1基因%重叠PCR%酶切连接%密码子优化
風疹E1基因%重疊PCR%酶切連接%密碼子優化
풍진E1기인%중첩PCR%매절련접%밀마자우화
目的:利用重叠PCR-酶切连接法人工合成风疹病毒E1基因的全长序列.方法:对风疹E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠PCR法分别合成该基因的3个片段,测序鉴定后以酶切连接法将各段拼接成全长为1 443 bp的RV rE1,将E1基因的全长序列克隆导入原核表达载体pET32a.结果:分别进行8轮、5轮和6轮的重叠PCR扩增,合成风疹基因3个片段;以酶切连接法将3个片段拼接成全长rE1基因并克隆入pET32a构建成载体pET32-RV rE1,PCR、酶切和测序鉴定结果表明,合成的E1基因大小、序列与预期相符;构建获得重组质粒pET32-RV rE1.结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因并构建其重组质粒pET32-RV rE1.
目的:利用重疊PCR-酶切連接法人工閤成風疹病毒E1基因的全長序列.方法:對風疹E1基因進行生物信息學分析,根據大腸桿菌密碼子偏愛性對其密碼子進行優化;設計多對寡覈苷痠引物,以重疊PCR法分彆閤成該基因的3箇片段,測序鑒定後以酶切連接法將各段拼接成全長為1 443 bp的RV rE1,將E1基因的全長序列剋隆導入原覈錶達載體pET32a.結果:分彆進行8輪、5輪和6輪的重疊PCR擴增,閤成風疹基因3箇片段;以酶切連接法將3箇片段拼接成全長rE1基因併剋隆入pET32a構建成載體pET32-RV rE1,PCR、酶切和測序鑒定結果錶明,閤成的E1基因大小、序列與預期相符;構建穫得重組質粒pET32-RV rE1.結論:成功閤成瞭密碼子優化的風疹病毒E1基因併構建其重組質粒pET32-RV rE1.
목적:이용중첩PCR-매절련접법인공합성풍진병독E1기인적전장서렬.방법:대풍진E1기인진행생물신식학분석,근거대장간균밀마자편애성대기밀마자진행우화;설계다대과핵감산인물,이중첩PCR법분별합성해기인적3개편단,측서감정후이매절련접법장각단병접성전장위1 443 bp적RV rE1,장E1기인적전장서렬극륭도입원핵표체재체pET32a.결과:분별진행8륜、5륜화6륜적중첩PCR확증,합성풍진기인3개편단;이매절련접법장3개편단병접성전장rE1기인병극륭입pET32a구건성재체pET32-RV rE1,PCR、매절화측서감정결과표명,합성적E1기인대소、서렬여예기상부;구건획득중조질립pET32-RV rE1.결론:성공합성료밀마자우화적풍진병독E1기인병구건기중조질립pET32-RV rE1.
