四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2011年
4期
506-509
,共4页
王春生%罗芳%张志人%赵健灵%朴善花%安铁洙
王春生%囉芳%張誌人%趙健靈%樸善花%安鐵洙
왕춘생%라방%장지인%조건령%박선화%안철수
蜘蛛拖丝蛋白%原核表达%蛋白纯化%抗血清制备
蜘蛛拖絲蛋白%原覈錶達%蛋白純化%抗血清製備
지주타사단백%원핵표체%단백순화%항혈청제비
为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b( + ),采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此重组蛋白进行His标签特异性的亲和纯化,再依次经SDS-PAGE、切胶和与佐剂混合后作为抗原;皮下多点注射法将抗原注入新西兰大白兔皮下进行免疫;采集已免疫的兔血清,采用ELISA检测方法对其效价进行检测.结果 显示,重组质粒2S-pET-52b( + )转化BL21-pLysS后获得最佳的表达菌株;在筛选得到的最佳IPTG、温度和时间(分别为1.0 mmol/L、30℃和2 h)条件下诱导获得2S-His重组蛋白;经免疫的4只兔血清中,2只兔的血清效价达1:25 600和1:12 800.表明利用2S-pET-52b( + )重组质粒成功获得可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清.本研究为加快建立在被毛中特异表达大量蜘蛛拖丝蛋白的新方法提供依据.
為瞭製備可用于擬蜘蛛拖絲蛋白體外檢測的抗血清,利用前期工作中穫得的蜘蛛拖絲蛋白基因重組原覈錶達載體2S-pET-52b( + ),採用原覈錶達方法穫得大量重組蜘蛛拖絲蛋白2S-His,對此重組蛋白進行His標籤特異性的親和純化,再依次經SDS-PAGE、切膠和與佐劑混閤後作為抗原;皮下多點註射法將抗原註入新西蘭大白兔皮下進行免疫;採集已免疫的兔血清,採用ELISA檢測方法對其效價進行檢測.結果 顯示,重組質粒2S-pET-52b( + )轉化BL21-pLysS後穫得最佳的錶達菌株;在篩選得到的最佳IPTG、溫度和時間(分彆為1.0 mmol/L、30℃和2 h)條件下誘導穫得2S-His重組蛋白;經免疫的4隻兔血清中,2隻兔的血清效價達1:25 600和1:12 800.錶明利用2S-pET-52b( + )重組質粒成功穫得可用于擬蜘蛛拖絲蛋白體外檢測的抗血清.本研究為加快建立在被毛中特異錶達大量蜘蛛拖絲蛋白的新方法提供依據.
위료제비가용우의지주타사단백체외검측적항혈청,이용전기공작중획득적지주타사단백기인중조원핵표체재체2S-pET-52b( + ),채용원핵표체방법획득대량중조지주타사단백2S-His,대차중조단백진행His표첨특이성적친화순화,재의차경SDS-PAGE、절효화여좌제혼합후작위항원;피하다점주사법장항원주입신서란대백토피하진행면역;채집이면역적토혈청,채용ELISA검측방법대기효개진행검측.결과 현시,중조질립2S-pET-52b( + )전화BL21-pLysS후획득최가적표체균주;재사선득도적최가IPTG、온도화시간(분별위1.0 mmol/L、30℃화2 h)조건하유도획득2S-His중조단백;경면역적4지토혈청중,2지토적혈청효개체1:25 600화1:12 800.표명이용2S-pET-52b( + )중조질립성공획득가용우의지주타사단백체외검측적항혈청.본연구위가쾌건립재피모중특이표체대량지주타사단백적신방법제공의거.
