中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
10期
866-870
,共5页
曾妮%宫苗苗%程朝飞%黄华欣%郭李平%李刚
曾妮%宮苗苗%程朝飛%黃華訢%郭李平%李剛
증니%궁묘묘%정조비%황화흔%곽리평%리강
狂犬病病毒%N蛋白%表达%单克隆抗体
狂犬病病毒%N蛋白%錶達%單剋隆抗體
광견병병독%N단백%표체%단극륭항체
目的 制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BAIB/c小鼠3次.取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合后,用pET-32a -RV-N重组蛋白作为筛选抗原,经3次亚克隆筛选后得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株单克隆抗体细胞株.亚类鉴定结果表明,其中lD9、2B6、6B5 3株亚类为IgG1,3C5、5F2的亚类为IgM.间接ELISA方法检测2B6单抗细胞腹水效价可达1∶106.经Protein G亲和层析柱纯化和脱盐后可得到浓度为2.5 mg/mL的高纯度的单克隆抗体.其免疫荧光试验结果表明5株单克隆抗体均能特异地与狂犬病病毒结合.结论 制备的单抗具有良好的特异性和敏感性,为后期诊断方法的建立奠定了基础.
目的 製備抗狂犬病病毒N蛋白單剋隆抗體,為建立快速準確的狂犬病病毒抗原檢測方法奠定基礎.方法 將狂犬病病毒Flury LEP株N基因剋隆至pGEX-6P-1錶達載體中,將純化後的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BAIB/c小鼠3次.取小鼠脾髒細胞和SP2/0細胞融閤後,用pET-32a -RV-N重組蛋白作為篩選抗原,經3次亞剋隆篩選後得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株單剋隆抗體細胞株.亞類鑒定結果錶明,其中lD9、2B6、6B5 3株亞類為IgG1,3C5、5F2的亞類為IgM.間接ELISA方法檢測2B6單抗細胞腹水效價可達1∶106.經Protein G親和層析柱純化和脫鹽後可得到濃度為2.5 mg/mL的高純度的單剋隆抗體.其免疫熒光試驗結果錶明5株單剋隆抗體均能特異地與狂犬病病毒結閤.結論 製備的單抗具有良好的特異性和敏感性,為後期診斷方法的建立奠定瞭基礎.
목적 제비항광견병병독N단백단극륭항체,위건립쾌속준학적광견병병독항원검측방법전정기출.방법 장광견병병독Flury LEP주N기인극륭지pGEX-6P-1표체재체중,장순화후적pGEX-6P-1-RV-N단백면역BAIB/c소서3차.취소서비장세포화SP2/0세포융합후,용pET-32a -RV-N중조단백작위사선항원,경3차아극륭사선후득도1D9、2B6、3C5、6B5급5F2 5주단극륭항체세포주.아류감정결과표명,기중lD9、2B6、6B5 3주아류위IgG1,3C5、5F2적아류위IgM.간접ELISA방법검측2B6단항세포복수효개가체1∶106.경Protein G친화층석주순화화탈염후가득도농도위2.5 mg/mL적고순도적단극륭항체.기면역형광시험결과표명5주단극륭항체균능특이지여광견병병독결합.결론 제비적단항구유량호적특이성화민감성,위후기진단방법적건립전정료기출.
