温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2012年
1期
48-52
,共5页
翁丛丛%方益民%黄润巧%林冬冬%张洪勤%施孟如
翁叢叢%方益民%黃潤巧%林鼕鼕%張洪勤%施孟如
옹총총%방익민%황윤교%림동동%장홍근%시맹여
超氧化物歧化酶%调控序列%重组PCR%红色荧光蛋白%基因%报告%大肠杆菌
超氧化物歧化酶%調控序列%重組PCR%紅色熒光蛋白%基因%報告%大腸桿菌
초양화물기화매%조공서렬%중조PCR%홍색형광단백%기인%보고%대장간균
目的 通过将大肠杆菌BL21中MnSOD、FeSOD以及Cu/ZnSOD调控序列(包括启动子,-3518～+15 bp)与红色荧光蛋白(RFP)连接,构建成含SOD调控序列的红色荧光蛋白报告基因,用以研究不同SOD启动子对RFP的调控作用.方法 采用重组PCR技术,分别构建以MnSOD、FeSOD、Cu/ZnSOD启动子驱动的RFP报告基因载体,并将构建的融合基因通过T克隆转化入大肠杆菌,通过不同浓度Cd2+作用,分别诱导RFP表达.结果 正确构建了三种SOD -RFP融合基因,重组PCR结果与测序结果完全一致;该报告基因在室温静息状态下,红色荧光有微弱表达,经Cd2+诱导后,红色荧光亮度明显增强,其中MnSOD调控序列驱动的RFP表达最为明显.结论 该报告基因载体的成功构建,为研究SOD的基因表达调控机制和研制检测环境中污染物的微生物传感器提供了重要基础和工具.
目的 通過將大腸桿菌BL21中MnSOD、FeSOD以及Cu/ZnSOD調控序列(包括啟動子,-3518～+15 bp)與紅色熒光蛋白(RFP)連接,構建成含SOD調控序列的紅色熒光蛋白報告基因,用以研究不同SOD啟動子對RFP的調控作用.方法 採用重組PCR技術,分彆構建以MnSOD、FeSOD、Cu/ZnSOD啟動子驅動的RFP報告基因載體,併將構建的融閤基因通過T剋隆轉化入大腸桿菌,通過不同濃度Cd2+作用,分彆誘導RFP錶達.結果 正確構建瞭三種SOD -RFP融閤基因,重組PCR結果與測序結果完全一緻;該報告基因在室溫靜息狀態下,紅色熒光有微弱錶達,經Cd2+誘導後,紅色熒光亮度明顯增彊,其中MnSOD調控序列驅動的RFP錶達最為明顯.結論 該報告基因載體的成功構建,為研究SOD的基因錶達調控機製和研製檢測環境中汙染物的微生物傳感器提供瞭重要基礎和工具.
목적 통과장대장간균BL21중MnSOD、FeSOD이급Cu/ZnSOD조공서렬(포괄계동자,-3518～+15 bp)여홍색형광단백(RFP)련접,구건성함SOD조공서렬적홍색형광단백보고기인,용이연구불동SOD계동자대RFP적조공작용.방법 채용중조PCR기술,분별구건이MnSOD、FeSOD、Cu/ZnSOD계동자구동적RFP보고기인재체,병장구건적융합기인통과T극륭전화입대장간균,통과불동농도Cd2+작용,분별유도RFP표체.결과 정학구건료삼충SOD -RFP융합기인,중조PCR결과여측서결과완전일치;해보고기인재실온정식상태하,홍색형광유미약표체,경Cd2+유도후,홍색형광량도명현증강,기중MnSOD조공서렬구동적RFP표체최위명현.결론 해보고기인재체적성공구건,위연구SOD적기인표체조공궤제화연제검측배경중오염물적미생물전감기제공료중요기출화공구.
