中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2003年
4期
281-285
,共5页
陈蓉芳%张天宝%印木泉%朱江波%郭苗莉
陳蓉芳%張天寶%印木泉%硃江波%郭苗莉
진용방%장천보%인목천%주강파%곽묘리
短指%少指%基因表达%基因文库
短指%少指%基因錶達%基因文庫
단지%소지%기인표체%기인문고
目的为筛选、克隆小鼠短指/缺指畸形肢体的特异表达基因,构建了GD18小鼠畸形肢体(短指/缺指)与正常肢体的差异表达的cDNA消减文库.方法应用抑制消减杂交技术(SSH),结合PCR cDNA合成法,将从总RNA中合成的双链cDNA,酶切成平均大小为400～600 bp的片段,经接头连接,两次消减杂交和两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,菌液PCR筛选有插入片段的SSH克隆.结果成功地构建了GD18小鼠畸形肢体(短指/缺指)差异表达的cDNA消减文库,从中挑取275个克隆进行菌液PCR分析,结果显示其中255均得到200～600 bp插入片段.结论 SSH与PCR合成双链cDNA,是一种自微量总RNA中构建高特异性的差异表达cDNA消减文库的有效方法.消减文库的构建,有助于筛选、克隆小鼠短指/缺指畸形肢体的特异表达基因.
目的為篩選、剋隆小鼠短指/缺指畸形肢體的特異錶達基因,構建瞭GD18小鼠畸形肢體(短指/缺指)與正常肢體的差異錶達的cDNA消減文庫.方法應用抑製消減雜交技術(SSH),結閤PCR cDNA閤成法,將從總RNA中閤成的雙鏈cDNA,酶切成平均大小為400～600 bp的片段,經接頭連接,兩次消減雜交和兩次抑製性PCR後,將產物與T/A載體連接構建cDNA消減文庫,併轉染大腸桿菌進行文庫擴增,菌液PCR篩選有插入片段的SSH剋隆.結果成功地構建瞭GD18小鼠畸形肢體(短指/缺指)差異錶達的cDNA消減文庫,從中挑取275箇剋隆進行菌液PCR分析,結果顯示其中255均得到200～600 bp插入片段.結論 SSH與PCR閤成雙鏈cDNA,是一種自微量總RNA中構建高特異性的差異錶達cDNA消減文庫的有效方法.消減文庫的構建,有助于篩選、剋隆小鼠短指/缺指畸形肢體的特異錶達基因.
목적위사선、극륭소서단지/결지기형지체적특이표체기인,구건료GD18소서기형지체(단지/결지)여정상지체적차이표체적cDNA소감문고.방법응용억제소감잡교기술(SSH),결합PCR cDNA합성법,장종총RNA중합성적쌍련cDNA,매절성평균대소위400～600 bp적편단,경접두련접,량차소감잡교화량차억제성PCR후,장산물여T/A재체련접구건cDNA소감문고,병전염대장간균진행문고확증,균액PCR사선유삽입편단적SSH극륭.결과성공지구건료GD18소서기형지체(단지/결지)차이표체적cDNA소감문고,종중도취275개극륭진행균액PCR분석,결과현시기중255균득도200～600 bp삽입편단.결론 SSH여PCR합성쌍련cDNA,시일충자미량총RNA중구건고특이성적차이표체cDNA소감문고적유효방법.소감문고적구건,유조우사선、극륭소서단지/결지기형지체적특이표체기인.
