CAJ | 학술논문

聚乙烯亚胺是一种新型阳离子多聚物基因释放载体,可结合浓缩DNA,通过粘附内吞,进入细胞,使携带的质粒表达.本研究目的通过对聚乙烯亚胺各种转染参数的测定,为合成以聚乙烯亚胺为骨架的人工载体积累数据.方法:本研究利用聚乙烯亚胺分别结合含β半乳糖甙酶报告基因的pSVβ表达质粒、含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP质粒转染Cos-7细胞,通过组织化学法测定细胞抽提产物中β半乳糖甙酶的表达量、流式细胞仪法测定绿色荧光蛋白阳性细胞的表达比例,来测定影响转基因效率的各种参数.结果:在培养液中,6μg/ml聚乙烯亚胺作用24h,NIH 3T3细胞生存率为64.2%,7μg/ml聚乙烯亚胺细胞生存率为54.4%.电泳阻滞试验,聚乙烯亚胺在N/P比在3.0以上方可完全结合DNA.溶酶体抑制剂氯喹可增加聚乙烯亚胺的转染效率.培养液中的白蛋白、血清可降低转染效率.作为配制聚乙烯亚胺/DNA复合物的溶媒,HEPES缓冲液优于生理盐水,生理盐水优于5%葡萄糖.配制聚乙烯亚胺/DNA复合物的溶媒中加入Mg2+降低转染效率.聚乙烯亚胺转染效率优于SuperFectTM(断裂型树突状多聚物),而毒性低于SuperFectTM.结论:本研究首次报道了聚乙烯亚胺与DNA结合配伍的N/P比计算公式,N/P=7.75×b/c,这里b是PEI的质量(μg),c是质粒的质量(μg);PEI的工作终浓度应≤6μg/ml.通过体外细胞试验证明,聚乙烯亚胺是一种有效的真核细胞转染剂和人工合成基因载体的骨架.
취을희아알시일충신형양리자다취물기인석방재체,가결합농축DNA,통과점부내탄,진입세포,사휴대적질립표체.본연구목적통과대취을희아알각충전염삼수적측정,위합성이취을희아알위골가적인공재체적루수거.방법:본연구이용취을희아알분별결합함β반유당대매보고기인적pSVβ표체질립、함록색형광단백보고기인적pEGFP질립전염Cos-7세포,통과조직화학법측정세포추제산물중β반유당대매적표체량、류식세포의법측정록색형광단백양성세포적표체비례,래측정영향전기인효솔적각충삼수.결과:재배양액중,6μg/ml취을희아알작용24h,NIH 3T3세포생존솔위64.2%,7μg/ml취을희아알세포생존솔위54.4%.전영조체시험,취을희아알재N/P비재3.0이상방가완전결합DNA.용매체억제제록규가증가취을희아알적전염효솔.배양액중적백단백、혈청가강저전염효솔.작위배제취을희아알/DNA복합물적용매,HEPES완충액우우생리염수,생리염수우우5%포도당.배제취을희아알/DNA복합물적용매중가입Mg2+강저전염효솔.취을희아알전염효솔우우SuperFectTM(단렬형수돌상다취물),이독성저우SuperFectTM.결론:본연구수차보도료취을희아알여DNA결합배오적N/P비계산공식,N/P=7.75×b/c,저리b시PEI적질량(μg),c시질립적질량(μg);PEI적공작종농도응≤6μg/ml.통과체외세포시험증명,취을희아알시일충유효적진핵세포전염제화인공합성기인재체적골가.