基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2006年
4期
376-380
,共5页
祝学卫%吴钢%曾武威%薛红%陈保生
祝學衛%吳鋼%曾武威%薛紅%陳保生
축학위%오강%증무위%설홍%진보생
人载脂蛋白A-Ⅰ%原核表达%α螺旋含量%脂质结合%细胞胆固醇外流
人載脂蛋白A-Ⅰ%原覈錶達%α螺鏇含量%脂質結閤%細胞膽固醇外流
인재지단백A-Ⅰ%원핵표체%α라선함량%지질결합%세포담고순외류
目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化.分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价.结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%.结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式.
目的為穫得高產量併具有正常結構和生物學活性的原覈錶達人載脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重組技術對人apoA-Ⅰ的前8箇氨基痠引入沉默突變,以pET-30b(+)為原覈錶達載體,在apoA-Ⅰ多肽鏈C-末耑引入6×組氨痠標籤,採用鎳親和層析對錶達蛋白進行純化.分彆使用圓二色分析、濁度澄清試驗和膽固醇外流試驗對重組apoA-Ⅰ的α螺鏇含量、脂質結閤動力學及促細胞膽固醇外流能力進行評價.結果穫得高錶達產量的重組apoA-Ⅰ(12 mg純化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重組蛋白的α螺鏇含量為(54±4)%,脂質結閤動力學速率常數k1/2為0.059±0.002 min-1,膽固醇外流百分比為(16.68±1.77)%.結論可穫得高產量併具有生物學活性的重組人apoA-Ⅰ;為構建apoA-Ⅰ其他突變體提供模式.
목적위획득고산량병구유정상결구화생물학활성적원핵표체인재지단백A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).방법이용DNA중조기술대인apoA-Ⅰ적전8개안기산인입침묵돌변,이pET-30b(+)위원핵표체재체,재apoA-Ⅰ다태련C-말단인입6×조안산표첨,채용얼친화층석대표체단백진행순화.분별사용원이색분석、탁도징청시험화담고순외류시험대중조apoA-Ⅰ적α라선함량、지질결합동역학급촉세포담고순외류능력진행평개.결과획득고표체산량적중조apoA-Ⅰ(12 mg순화apoA-Ⅰ단백/L균액);중조단백적α라선함량위(54±4)%,지질결합동역학속솔상수k1/2위0.059±0.002 min-1,담고순외류백분비위(16.68±1.77)%.결론가획득고산량병구유생물학활성적중조인apoA-Ⅰ;위구건apoA-Ⅰ기타돌변체제공모식.
