生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2006年
5期
696-699
,共4页
李晓瑾%刘家云%苏明权%闰玮%郝晓柯
李曉瑾%劉傢雲%囌明權%閏瑋%郝曉柯
리효근%류가운%소명권%윤위%학효가
烟曲霉%RNA干扰%dsRNA%arp1
煙麯黴%RNA榦擾%dsRNA%arp1
연곡매%RNA간우%dsRNA%arp1
目的:用dsRNA介导的RNA干扰(RNAi)特异性沉默烟曲霉色素形成相关基因arp1,使arp1基因mRNA水平降低,产生与母代绿色菌株不同的灰色菌株,类似基因敲除的表型.方法:液氮研磨烟曲霉,提取总mRNA,用含T7启动子序列的特异引物进行RT-pCR,扩增出两端含T7启动子序列的arp1基因,以此为模版使用MEGAscript RNAi Kit体外转录合成dsRNA,用合成的dsRNA电转化烟曲霉后,观察其表型变化,对转化菌进行RT-pCR,分析mRNA变化.结果:转化菌的arp1基因mRNA水平降低,产生与母代绿色菌株不同的灰色菌株,类似基因敲除的表型.结论:RNAi在烟曲霉中的应用使快速敲除靶基因产生类似基因敲除的表型,为研究靶基因功能、识别可能的药物作用靶位奠定了良好的基础.
目的:用dsRNA介導的RNA榦擾(RNAi)特異性沉默煙麯黴色素形成相關基因arp1,使arp1基因mRNA水平降低,產生與母代綠色菌株不同的灰色菌株,類似基因敲除的錶型.方法:液氮研磨煙麯黴,提取總mRNA,用含T7啟動子序列的特異引物進行RT-pCR,擴增齣兩耑含T7啟動子序列的arp1基因,以此為模版使用MEGAscript RNAi Kit體外轉錄閤成dsRNA,用閤成的dsRNA電轉化煙麯黴後,觀察其錶型變化,對轉化菌進行RT-pCR,分析mRNA變化.結果:轉化菌的arp1基因mRNA水平降低,產生與母代綠色菌株不同的灰色菌株,類似基因敲除的錶型.結論:RNAi在煙麯黴中的應用使快速敲除靶基因產生類似基因敲除的錶型,為研究靶基因功能、識彆可能的藥物作用靶位奠定瞭良好的基礎.
목적:용dsRNA개도적RNA간우(RNAi)특이성침묵연곡매색소형성상관기인arp1,사arp1기인mRNA수평강저,산생여모대록색균주불동적회색균주,유사기인고제적표형.방법:액담연마연곡매,제취총mRNA,용함T7계동자서렬적특이인물진행RT-pCR,확증출량단함T7계동자서렬적arp1기인,이차위모판사용MEGAscript RNAi Kit체외전록합성dsRNA,용합성적dsRNA전전화연곡매후,관찰기표형변화,대전화균진행RT-pCR,분석mRNA변화.결과:전화균적arp1기인mRNA수평강저,산생여모대록색균주불동적회색균주,유사기인고제적표형.결론:RNAi재연곡매중적응용사쾌속고제파기인산생유사기인고제적표형,위연구파기인공능、식별가능적약물작용파위전정료량호적기출.
