CAJ | 학술논문

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡. 方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况. 结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%. 半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. 经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNA ladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%. 结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础.
목적:응용RNA간우기술(RNAi)연구침대survivin기인적siRNA,억제survivin기인적표체병유도식관암세포계EC-109세포적조망. 방법:구건침대survivin적siRNA표체질립,전염지EC-109세포,형광현미경판단전염효솔,단백질인적화반정량RT-PCR검측survivin단백표체급기인전록수평적변화,병재불동시간점수집전염세포,이용류식세포술급기인조DNA조망검측시제합,관찰siRNA억제survivin기인표체후유도세포조망적정황. 결과:형광현미경결과표명,중조질립전염효솔체46.70%. 반정량RT-PCR검측도pSIREN/S질립재EC-109세포내대survivin기인적전록억제솔위74.04%;단백질인적결과표명,전염중조질립pSIREN/S적EC-109세포survivin단백표체량부위정상조적41.64%,이대조질립pSIREN/CN대survivin기인적단백표체급전록균몰유억제작용. 경pSIREN/S전염적EC-109세포기인조DNA출현명현적DNA ladder,류식세포의분석결과야현시조망세포위60.78%. 결론:survivin특이성siRNA가명현억제survivin기인적전록화표체,병능유효지유도EC-109세포적조망,위하일보재체내이용pSIREN/S중조질립침적survivin기인,촉종류세포적조망제공실험기출.