中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
5期
453-458
,共6页
鲜墨%张莉滟%童荔%甘慧泉%吕志跃%何思杰%郑焕钦%吴忠道
鮮墨%張莉滟%童荔%甘慧泉%呂誌躍%何思傑%鄭煥欽%吳忠道
선묵%장리염%동려%감혜천%려지약%하사걸%정환흠%오충도
肺炎链球菌%LytA表位预测%重组表达
肺炎鏈毬菌%LytA錶位預測%重組錶達
폐염련구균%LytA표위예측%중조표체
目的 用生物信息学的方法预测肺炎链球菌自溶酶蛋白(LytA)可能的抗原表位,合成带有linker(Gly4Ser1)3序列的融合基因片断(l1l2),并在原核系统表达.方法 利用多种生物信息学软件,在二级结构预测抗原表位分值的基础上结合单参数分析结果,预测并设计LytA可能的重组抗原表位(L1L2).扩增该表位基因1112,利用分子克隆技术构建重组质粒.经测序鉴定后,转入宿主菌JM109中原核表达L1L3多肽片断与载体标签蛋白还原性谷胱苷肽(GST)的融合蛋白GST-L1L2.结果 预测表明序列2～28(EINVSKLRTDLPQVGVQPYRQVHAHST)、序列98～112(FMTDYRLYIELLRNL)分别为可能的B细胞和T细胞抗原表位.用PCR技术合成了l1l2片段,构建重组质粒pGEX-4T-1-l1l2,成功转化大肠杆菌JM109.结论 经测序验证成功构建了重组质粒pGEX-L1L2,并转化大肠杆菌JM109,SDS-PAGE分析显示该重组质粒在原核系统中得到了表达,为后继多肽疫苗研究奠定了基础.
目的 用生物信息學的方法預測肺炎鏈毬菌自溶酶蛋白(LytA)可能的抗原錶位,閤成帶有linker(Gly4Ser1)3序列的融閤基因片斷(l1l2),併在原覈繫統錶達.方法 利用多種生物信息學軟件,在二級結構預測抗原錶位分值的基礎上結閤單參數分析結果,預測併設計LytA可能的重組抗原錶位(L1L2).擴增該錶位基因1112,利用分子剋隆技術構建重組質粒.經測序鑒定後,轉入宿主菌JM109中原覈錶達L1L3多肽片斷與載體標籤蛋白還原性穀胱苷肽(GST)的融閤蛋白GST-L1L2.結果 預測錶明序列2～28(EINVSKLRTDLPQVGVQPYRQVHAHST)、序列98～112(FMTDYRLYIELLRNL)分彆為可能的B細胞和T細胞抗原錶位.用PCR技術閤成瞭l1l2片段,構建重組質粒pGEX-4T-1-l1l2,成功轉化大腸桿菌JM109.結論 經測序驗證成功構建瞭重組質粒pGEX-L1L2,併轉化大腸桿菌JM109,SDS-PAGE分析顯示該重組質粒在原覈繫統中得到瞭錶達,為後繼多肽疫苗研究奠定瞭基礎.
목적 용생물신식학적방법예측폐염련구균자용매단백(LytA)가능적항원표위,합성대유linker(Gly4Ser1)3서렬적융합기인편단(l1l2),병재원핵계통표체.방법 이용다충생물신식학연건,재이급결구예측항원표위분치적기출상결합단삼수분석결과,예측병설계LytA가능적중조항원표위(L1L2).확증해표위기인1112,이용분자극륭기술구건중조질립.경측서감정후,전입숙주균JM109중원핵표체L1L3다태편단여재체표첨단백환원성곡광감태(GST)적융합단백GST-L1L2.결과 예측표명서렬2～28(EINVSKLRTDLPQVGVQPYRQVHAHST)、서렬98～112(FMTDYRLYIELLRNL)분별위가능적B세포화T세포항원표위.용PCR기술합성료l1l2편단,구건중조질립pGEX-4T-1-l1l2,성공전화대장간균JM109.결론 경측서험증성공구건료중조질립pGEX-L1L2,병전화대장간균JM109,SDS-PAGE분석현시해중조질립재원핵계통중득도료표체,위후계다태역묘연구전정료기출.
