植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2007年
4期
356-361
,共6页
郑银英%王国平%洪霓%宋艳苏%游红
鄭銀英%王國平%洪霓%宋豔囌%遊紅
정은영%왕국평%홍예%송염소%유홍
苹果褪绿叶斑病毒%cp基因%序列分析%原核表达
蘋果褪綠葉斑病毒%cp基因%序列分析%原覈錶達
평과퇴록협반병독%cp기인%서렬분석%원핵표체
从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C 2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1 768 nt(ACLSV-HBP)和1 751 nt(ACLSV-C).这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582 nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%.将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%.将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46 kDa.Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性.
從桃和蘋果上分離得到蘋果褪綠葉斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C 2箇分離物,採用RT-PCR法進行擴增,所穫擴增片段經序列測定,其全長分彆為1 768 nt(ACLSV-HBP)和1 751 nt(ACLSV-C).這2箇分離物擴增片段全長的同源性為83%,mp基因片段覈苷痠和推導編碼氨基痠序列同源性分彆為82.6%和87.1%;cp基因均由582 nt組成,其覈苷痠和推導編碼氨基痠序列同源性分彆為87.8%和95.9%.將2箇分離物的cp基因與已報道ACLSV分離物進行序列同源性比較,結果顯示ACLSV-HBP與SX/2的cp基因覈苷痠序列及推導編碼氨基痠序列同源性最高,分彆為94.0%和96.4%.將ACLSV-HBP分離物的cp基因剋隆到原覈錶達載體pGEX-KG,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,SDS-PAGE分析錶明,融閤蛋白大小約為46 kDa.Western-blot分析錶明,該基因在大腸桿菌內得到高效錶達,融閤蛋白具有抗原性.
종도화평과상분리득도평과퇴록협반병독ACLSV-HBP화ACLSV-C 2개분리물,채용RT-PCR법진행확증,소획확증편단경서렬측정,기전장분별위1 768 nt(ACLSV-HBP)화1 751 nt(ACLSV-C).저2개분리물확증편단전장적동원성위83%,mp기인편단핵감산화추도편마안기산서렬동원성분별위82.6%화87.1%;cp기인균유582 nt조성,기핵감산화추도편마안기산서렬동원성분별위87.8%화95.9%.장2개분리물적cp기인여이보도ACLSV분리물진행서렬동원성비교,결과현시ACLSV-HBP여SX/2적cp기인핵감산서렬급추도편마안기산서렬동원성최고,분별위94.0%화96.4%.장ACLSV-HBP분리물적cp기인극륭도원핵표체재체pGEX-KG,재대장간균BL21(DE3)중유도표체,SDS-PAGE분석표명,융합단백대소약위46 kDa.Western-blot분석표명,해기인재대장간균내득도고효표체,융합단백구유항원성.
