热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
4期
340-343
,共4页
林斌%田新贵%唐启慧%王长兵%游爱萍%周荣
林斌%田新貴%唐啟慧%王長兵%遊愛萍%週榮
림빈%전신귀%당계혜%왕장병%유애평%주영
副流感病毒%核衣壳蛋白%基因克隆%基因表达%多克隆抗体
副流感病毒%覈衣殼蛋白%基因剋隆%基因錶達%多剋隆抗體
부류감병독%핵의각단백%기인극륭%기인표체%다극륭항체
目的 表达Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,为制备抗体作前期工作.方法 从分离培养的Ⅱ型副流感病毒标本中RT-PCR扩增出核衣壳蛋白基因,Nde Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切PCR产物,定向连接到原核表达载体pQE2中,得到重组表达质粒pQEHpI2NP,重组表达质粒进行DNA测序鉴定,转化大肠杆菌BL21(DE3).IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的 蛋白的表达.利用Ni-NTA agarose纯化带6个组氨酸标记的重组蛋白,重组蛋白免疫小鼠,制备抗Hpl2NP多抗,Hep-2细胞培养的Ⅱ型副流感病毒制备可溶性抗原.Western-blot分析.结果 构建了表达重组质粒pQE2_Hpl2NP,测序鉴定了克隆序列的准确性,在大肠杆菌中成功地表达并纯化得到重组核衣壳蛋白.经Western-blot证实,重组蛋白免疫的小鼠血清与细胞培养的Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白有特异性反应.结论 成功表达了Ⅱ型副流感病毒核衣壳蛋白,并制备了抗Hpl2NP多抗.
目的 錶達Ⅱ型副流感病毒覈衣殼蛋白,為製備抗體作前期工作.方法 從分離培養的Ⅱ型副流感病毒標本中RT-PCR擴增齣覈衣殼蛋白基因,Nde Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切PCR產物,定嚮連接到原覈錶達載體pQE2中,得到重組錶達質粒pQEHpI2NP,重組錶達質粒進行DNA測序鑒定,轉化大腸桿菌BL21(DE3).IPTG誘導錶達,SDS-PAGE檢測目的 蛋白的錶達.利用Ni-NTA agarose純化帶6箇組氨痠標記的重組蛋白,重組蛋白免疫小鼠,製備抗Hpl2NP多抗,Hep-2細胞培養的Ⅱ型副流感病毒製備可溶性抗原.Western-blot分析.結果 構建瞭錶達重組質粒pQE2_Hpl2NP,測序鑒定瞭剋隆序列的準確性,在大腸桿菌中成功地錶達併純化得到重組覈衣殼蛋白.經Western-blot證實,重組蛋白免疫的小鼠血清與細胞培養的Ⅱ型副流感病毒覈衣殼蛋白有特異性反應.結論 成功錶達瞭Ⅱ型副流感病毒覈衣殼蛋白,併製備瞭抗Hpl2NP多抗.
목적 표체Ⅱ형부류감병독핵의각단백,위제비항체작전기공작.방법 종분리배양적Ⅱ형부류감병독표본중RT-PCR확증출핵의각단백기인,Nde Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절PCR산물,정향련접도원핵표체재체pQE2중,득도중조표체질립pQEHpI2NP,중조표체질립진행DNA측서감정,전화대장간균BL21(DE3).IPTG유도표체,SDS-PAGE검측목적 단백적표체.이용Ni-NTA agarose순화대6개조안산표기적중조단백,중조단백면역소서,제비항Hpl2NP다항,Hep-2세포배양적Ⅱ형부류감병독제비가용성항원.Western-blot분석.결과 구건료표체중조질립pQE2_Hpl2NP,측서감정료극륭서렬적준학성,재대장간균중성공지표체병순화득도중조핵의각단백.경Western-blot증실,중조단백면역적소서혈청여세포배양적Ⅱ형부류감병독핵의각단백유특이성반응.결론 성공표체료Ⅱ형부류감병독핵의각단백,병제비료항Hpl2NP다항.
