中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
10期
1801-1805
,共5页
兰海%黄富国%杨志明%罗静聪%李秀群
蘭海%黃富國%楊誌明%囉靜聰%李秀群
란해%황부국%양지명%라정총%리수군
前脂肪细胞%小肠黏膜下层%组织工程%细胞分化%细胞增殖
前脂肪細胞%小腸黏膜下層%組織工程%細胞分化%細胞增殖
전지방세포%소장점막하층%조직공정%세포분화%세포증식
背景:细胞与支架的成功复合是组织工程重要的技术环节,小肠黏膜下层作为一种生物衍生材料具有良好的细胞相容性,同时促血管化能力较强.目的:观察前脂肪细胞与小肠黏膜下层的体外复合情况及其黏附状态.设计、时间及地点:2004-07/2005-07在四川I大学华西医院组织工程实验室完成的随机对照细胞观察.材料:前脂肪细胞来源于腰椎创伤前路手术的成年女性腹部皮下脂肪组织.小肠黏膜下层来源于新鲜猪大肠,为白色半透明膜,由四川大学华西医院组织工程实验室制各.方法:将脂肪组织剪碎成颗粒状,采用酶消化法获得原代前脂肪细胞,传代后加入含有地塞米松、胰岛素、IBMX、吲哚美辛的诱导培养基进行扩增.将小肠黏膜下层预湿,分3种方式,即分别用磷酸盐缓冲液、10%胎牛血清、10%胎牛血清+DMEM浸泡.取第3代前脂肪细胞制备细胞悬液,分两种方法接种在小肠黏膜下层:浸渍法是直接向置有小肠黏膜下层的孔内加入1 mL细胞悬液;沉淀法是向每个小肠黏膜下层的表面均匀滴入按所需接种密度高浓缩的细胞悬液20 μL.主要观察指标:MTT法检测小肠黏膜下层经不同预湿和接种方法对黏附细胞数的影响.苏木精-伊红染色和电镜观察前脂肪细胞在小肠黏膜下层的黏附状态.结果;相同接种方法下,经3种方式预湿的小肠黏膜下层细胞吸光度值基本相似(P＞0.05).相同预湿方式下,沉淀法接种细胞黏附率显著高于浸渍法(P＜0.05).采用沉淀法接种复合,按种密度为(2.5～7.5)×104 /cm2时黏附细胞数逐渐增多,呈正性相关(r=0.93,P＜0.05),升高至1×105 /cm2后黏附细胞数不再增加.接种24 h后,前脂肪细胞能够在小肠黏膜下层表面生长,并有突起长出.结论:①小肠黏膜下层给予不同的预湿方式对前脂肪细胞黏附状态无影响,但沉淀法接种复合效果优于浸渍法.②1×105 /cm2为前脂肪细胞最佳接种密度,其在小肠黏膜下层上具有良好的黏附性.
揹景:細胞與支架的成功複閤是組織工程重要的技術環節,小腸黏膜下層作為一種生物衍生材料具有良好的細胞相容性,同時促血管化能力較彊.目的:觀察前脂肪細胞與小腸黏膜下層的體外複閤情況及其黏附狀態.設計、時間及地點:2004-07/2005-07在四川I大學華西醫院組織工程實驗室完成的隨機對照細胞觀察.材料:前脂肪細胞來源于腰椎創傷前路手術的成年女性腹部皮下脂肪組織.小腸黏膜下層來源于新鮮豬大腸,為白色半透明膜,由四川大學華西醫院組織工程實驗室製各.方法:將脂肪組織剪碎成顆粒狀,採用酶消化法穫得原代前脂肪細胞,傳代後加入含有地塞米鬆、胰島素、IBMX、吲哚美辛的誘導培養基進行擴增.將小腸黏膜下層預濕,分3種方式,即分彆用燐痠鹽緩遲液、10%胎牛血清、10%胎牛血清+DMEM浸泡.取第3代前脂肪細胞製備細胞懸液,分兩種方法接種在小腸黏膜下層:浸漬法是直接嚮置有小腸黏膜下層的孔內加入1 mL細胞懸液;沉澱法是嚮每箇小腸黏膜下層的錶麵均勻滴入按所需接種密度高濃縮的細胞懸液20 μL.主要觀察指標:MTT法檢測小腸黏膜下層經不同預濕和接種方法對黏附細胞數的影響.囌木精-伊紅染色和電鏡觀察前脂肪細胞在小腸黏膜下層的黏附狀態.結果;相同接種方法下,經3種方式預濕的小腸黏膜下層細胞吸光度值基本相似(P＞0.05).相同預濕方式下,沉澱法接種細胞黏附率顯著高于浸漬法(P＜0.05).採用沉澱法接種複閤,按種密度為(2.5～7.5)×104 /cm2時黏附細胞數逐漸增多,呈正性相關(r=0.93,P＜0.05),升高至1×105 /cm2後黏附細胞數不再增加.接種24 h後,前脂肪細胞能夠在小腸黏膜下層錶麵生長,併有突起長齣.結論:①小腸黏膜下層給予不同的預濕方式對前脂肪細胞黏附狀態無影響,但沉澱法接種複閤效果優于浸漬法.②1×105 /cm2為前脂肪細胞最佳接種密度,其在小腸黏膜下層上具有良好的黏附性.
배경:세포여지가적성공복합시조직공정중요적기술배절,소장점막하층작위일충생물연생재료구유량호적세포상용성,동시촉혈관화능력교강.목적:관찰전지방세포여소장점막하층적체외복합정황급기점부상태.설계、시간급지점:2004-07/2005-07재사천I대학화서의원조직공정실험실완성적수궤대조세포관찰.재료:전지방세포래원우요추창상전로수술적성년녀성복부피하지방조직.소장점막하층래원우신선저대장,위백색반투명막,유사천대학화서의원조직공정실험실제각.방법:장지방조직전쇄성과립상,채용매소화법획득원대전지방세포,전대후가입함유지새미송、이도소、IBMX、신타미신적유도배양기진행확증.장소장점막하층예습,분3충방식,즉분별용린산염완충액、10%태우혈청、10%태우혈청+DMEM침포.취제3대전지방세포제비세포현액,분량충방법접충재소장점막하층:침지법시직접향치유소장점막하층적공내가입1 mL세포현액;침정법시향매개소장점막하층적표면균균적입안소수접충밀도고농축적세포현액20 μL.주요관찰지표:MTT법검측소장점막하층경불동예습화접충방법대점부세포수적영향.소목정-이홍염색화전경관찰전지방세포재소장점막하층적점부상태.결과;상동접충방법하,경3충방식예습적소장점막하층세포흡광도치기본상사(P＞0.05).상동예습방식하,침정법접충세포점부솔현저고우침지법(P＜0.05).채용침정법접충복합,안충밀도위(2.5～7.5)×104 /cm2시점부세포수축점증다,정정성상관(r=0.93,P＜0.05),승고지1×105 /cm2후점부세포수불재증가.접충24 h후,전지방세포능구재소장점막하층표면생장,병유돌기장출.결론:①소장점막하층급여불동적예습방식대전지방세포점부상태무영향,단침정법접충복합효과우우침지법.②1×105 /cm2위전지방세포최가접충밀도,기재소장점막하층상구유량호적점부성.
