中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
46-51
,共6页
刘艳华%高姗%康琳%王俊红%赵金银%高艳丽%胡瑞%王景林
劉豔華%高姍%康琳%王俊紅%趙金銀%高豔麗%鬍瑞%王景林
류염화%고산%강림%왕준홍%조금은%고염려%호서%왕경림
Ⅰ型促性腺激素释放激素%绿脓杆菌外毒素结构域Ⅱ%丝瓜毒素%重组嵌合毒素细胞毒性
Ⅰ型促性腺激素釋放激素%綠膿桿菌外毒素結構域Ⅱ%絲瓜毒素%重組嵌閤毒素細胞毒性
Ⅰ형촉성선격소석방격소%록농간균외독소결구역Ⅱ%사과독소%중조감합독소세포독성
目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化.纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用.结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%.GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用.结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用.
目的:製備以Ⅰ型促性腺激素釋放激素(GnRH Ⅰ)為導嚮部分,以綠膿桿菌外毒素的結構域Ⅱ(PEⅡ)為轉膜區,以絲瓜毒素luffinS2為毒性部分的重組嵌閤毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,體外實驗檢測其對腫瘤細胞的殺傷作用.方法:重疊PCR法擴增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,剋隆至錶達載體pET32a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),挑取暘性剋隆誘導錶達,產物用Ni-NTA親和層析柱純化.純化蛋白經重組腸激酶(rEK)切割去除Trx融閤蛋白,XTT法檢測重組毒素對HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鷄胚成纖維細胞(CEF)的體外細胞毒作用.結果:成功構建瞭GnRH-PEⅡ-luffinS的錶達質粒,併在大腸桿菌中穫得錶達,純化後的純度為94%.GnRH-PEⅡ-luffinS對HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分彆為13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml和26.07μg/ml,而對CEF無作用.結論:重組嵌閤毒素GnRH-PEⅡ-luffinS對腫瘤細胞有較彊的殺傷作用.
목적:제비이Ⅰ형촉성선격소석방격소(GnRH Ⅰ)위도향부분,이록농간균외독소적결구역Ⅱ(PEⅡ)위전막구,이사과독소luffinS2위독성부분적중조감합독소GnRH-PEⅡ-luffinS,체외실험검측기대종류세포적살상작용.방법:중첩PCR법확증GnRH-PEⅡ-luffinS적기인,극륭지표체재체pET32a중,전화대장간균BL21(DE3),도취양성극륭유도표체,산물용Ni-NTA친화층석주순화.순화단백경중조장격매(rEK)절할거제Trx융합단백,XTT법검측중조독소대HeLa,A549,HepG-2,SP2/0화계배성섬유세포(CEF)적체외세포독작용.결과:성공구건료GnRH-PEⅡ-luffinS적표체질립,병재대장간균중획득표체,순화후적순도위94%.GnRH-PEⅡ-luffinS대HeLa,A549,HepG-2화SP2/0적IC50분별위13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml화26.07μg/ml,이대CEF무작용.결론:중조감합독소GnRH-PEⅡ-luffinS대종류세포유교강적살상작용.
