生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
9期
1620-1624
,共5页
孙玉成%周凤秋%万家余%高宏伟
孫玉成%週鳳鞦%萬傢餘%高宏偉
손옥성%주봉추%만가여%고굉위
蛋白转导%神经肽Y(NPY)%融合基因%克隆%分泌表达
蛋白轉導%神經肽Y(NPY)%融閤基因%剋隆%分泌錶達
단백전도%신경태Y(NPY)%융합기인%극륭%분비표체
应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY.PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶Sac Ⅰ线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中.阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达.经过120 h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性.获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础.
應用重疊延伸PCR方法擴增HIV-1 TAT蛋白轉導結構域(PTD)與鼠源神經肽Y(NPY)的融閤基因,剋隆目的片段併插入酵母錶達載體pPICZαA,構建成重組錶達質粒pPICZα-PTD-NPY.PCR和酶切鑒定及測序正確後,經限製性內切酶Sac Ⅰ線性化重組錶達質粒併通過電轉化整閤到巴斯德畢赤酵母菌GS115的染色體基因組中.暘性重組酵母菌用含1%甲醇的培養基誘導其分泌錶達.經過120 h的誘導,取上清濃縮除鹽後進行SDS-PAGE電泳,錶明該繫統成功錶達瞭PTD-NPY融閤蛋白,Western blotting實驗證實錶達產物具有特異性.穫得真覈錶達的PTD-NPY融閤蛋白,為下一步的應用研究提供瞭物質基礎.
응용중첩연신PCR방법확증HIV-1 TAT단백전도결구역(PTD)여서원신경태Y(NPY)적융합기인,극륭목적편단병삽입효모표체재체pPICZαA,구건성중조표체질립pPICZα-PTD-NPY.PCR화매절감정급측서정학후,경한제성내절매Sac Ⅰ선성화중조표체질립병통과전전화정합도파사덕필적효모균GS115적염색체기인조중.양성중조효모균용함1%갑순적배양기유도기분비표체.경과120 h적유도,취상청농축제염후진행SDS-PAGE전영,표명해계통성공표체료PTD-NPY융합단백,Western blotting실험증실표체산물구유특이성.획득진핵표체적PTD-NPY융합단백,위하일보적응용연구제공료물질기출.
