生物医学工程与临床
生物醫學工程與臨床
생물의학공정여림상
BIOMEDICAL ENGINEERING AND CLINICAL MEDICINE
2009年
1期
58-61
,共4页
顾海伦%刘莉%王欢%段景柱%李建军
顧海倫%劉莉%王歡%段景柱%李建軍
고해륜%류리%왕환%단경주%리건군
椎间盘%骨形态发生蛋白-2%转化生长因子-β1%基因转染
椎間盤%骨形態髮生蛋白-2%轉化生長因子-β1%基因轉染
추간반%골형태발생단백-2%전화생장인자-β1%기인전염
目的 探讨骨形态发生蛋白腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)和转化生长因子-β1.腺病毒表达载体(Ad-TGF-β1)共转染人退变椎间盘髓核细胞后对aggrecan和Ⅱ型胶原合成的影响.方法 人退变椎间盘髓核细胞体外分离培养至第2代.为检测转入目的 基因后蛋白表达情况,将其分为空白对照组、目的 基因组和共转染组,细胞分别转染Ad-BMP-2(50MOI)、Ad-TGF-β1(50 MOI)及共转染(各50 MOI),再用Western blot方法检测转染后细胞目的 蛋白的表达;为探讨目的 基因对细胞外基质代谢的影响,将研究对象分为空白对照组(A组)、Ad-BMP-2 100MOI(B组)、Ad-TGF-β1100 MOI(C组)、Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1各50 MOI(D组),用EUSA法分别检测转染第3天和第6天细胞上清液中aggrecan和Ⅱ型胶原的蛋白表达量.RT-PCR检测第6天髓核细胞内Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA的表达水平.应用方差分析比较组间差异,以P<0.05表示差异有统计学意义.结果 在转染目的 基因载体后,目的 蛋白表达增加.在转染后第3天和第6天各转染组细胞培养基中aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组(P<0.01),与转染单个基因组相比,共转染组的aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量明显增加(P<0.01);并且在转染后第6天共转染组髓核细胞内aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达也明显增加(P<0.01).结论 转染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促进aggrecan和Ⅱ型胶原合成,同时上调aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA的表达;共转染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1对细胞外基质的mRNA和蛋白合成有协同作用.
目的 探討骨形態髮生蛋白腺病毒錶達載體(Ad-BMP-2)和轉化生長因子-β1.腺病毒錶達載體(Ad-TGF-β1)共轉染人退變椎間盤髓覈細胞後對aggrecan和Ⅱ型膠原閤成的影響.方法 人退變椎間盤髓覈細胞體外分離培養至第2代.為檢測轉入目的 基因後蛋白錶達情況,將其分為空白對照組、目的 基因組和共轉染組,細胞分彆轉染Ad-BMP-2(50MOI)、Ad-TGF-β1(50 MOI)及共轉染(各50 MOI),再用Western blot方法檢測轉染後細胞目的 蛋白的錶達;為探討目的 基因對細胞外基質代謝的影響,將研究對象分為空白對照組(A組)、Ad-BMP-2 100MOI(B組)、Ad-TGF-β1100 MOI(C組)、Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1各50 MOI(D組),用EUSA法分彆檢測轉染第3天和第6天細胞上清液中aggrecan和Ⅱ型膠原的蛋白錶達量.RT-PCR檢測第6天髓覈細胞內Ⅱ型膠原和aggrecan的mRNA的錶達水平.應用方差分析比較組間差異,以P<0.05錶示差異有統計學意義.結果 在轉染目的 基因載體後,目的 蛋白錶達增加.在轉染後第3天和第6天各轉染組細胞培養基中aggrecan和Ⅱ型膠原蛋白錶達量高于對照組(P<0.01),與轉染單箇基因組相比,共轉染組的aggrecan和Ⅱ型膠原蛋白錶達量明顯增加(P<0.01);併且在轉染後第6天共轉染組髓覈細胞內aggrecan和Ⅱ型膠原mRNA錶達也明顯增加(P<0.01).結論 轉染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促進aggrecan和Ⅱ型膠原閤成,同時上調aggrecan和Ⅱ型膠原mRNA的錶達;共轉染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1對細胞外基質的mRNA和蛋白閤成有協同作用.
목적 탐토골형태발생단백선병독표체재체(Ad-BMP-2)화전화생장인자-β1.선병독표체재체(Ad-TGF-β1)공전염인퇴변추간반수핵세포후대aggrecan화Ⅱ형효원합성적영향.방법 인퇴변추간반수핵세포체외분리배양지제2대.위검측전입목적 기인후단백표체정황,장기분위공백대조조、목적 기인조화공전염조,세포분별전염Ad-BMP-2(50MOI)、Ad-TGF-β1(50 MOI)급공전염(각50 MOI),재용Western blot방법검측전염후세포목적 단백적표체;위탐토목적 기인대세포외기질대사적영향,장연구대상분위공백대조조(A조)、Ad-BMP-2 100MOI(B조)、Ad-TGF-β1100 MOI(C조)、Ad-BMP-2화Ad-TGF-β1각50 MOI(D조),용EUSA법분별검측전염제3천화제6천세포상청액중aggrecan화Ⅱ형효원적단백표체량.RT-PCR검측제6천수핵세포내Ⅱ형효원화aggrecan적mRNA적표체수평.응용방차분석비교조간차이,이P<0.05표시차이유통계학의의.결과 재전염목적 기인재체후,목적 단백표체증가.재전염후제3천화제6천각전염조세포배양기중aggrecan화Ⅱ형효원단백표체량고우대조조(P<0.01),여전염단개기인조상비,공전염조적aggrecan화Ⅱ형효원단백표체량명현증가(P<0.01);병차재전염후제6천공전염조수핵세포내aggrecan화Ⅱ형효원mRNA표체야명현증가(P<0.01).결론 전염Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1능촉진aggrecan화Ⅱ형효원합성,동시상조aggrecan화Ⅱ형효원mRNA적표체;공전염Ad-BMP-2화Ad-TGF-β1대세포외기질적mRNA화단백합성유협동작용.
