卒中与神经疾病
卒中與神經疾病
졸중여신경질병
2009年
1期
3-6
,共4页
王雪贞%曾莉%降风%唐荣华%张旻%卜碧涛
王雪貞%曾莉%降風%唐榮華%張旻%蔔碧濤
왕설정%증리%강풍%당영화%장민%복벽도
慢病毒载体%TNF-α%神经系统变性疾病%RNA干扰
慢病毒載體%TNF-α%神經繫統變性疾病%RNA榦擾
만병독재체%TNF-α%신경계통변성질병%RNA간우
目的 为探讨TNF-α在C型Niemann-Pick病(NPC)神经变性中的作用,构建携带小鼠TNFa-siRNA的慢病毒载体并进行体外研究. 方法 设计3个TNF-α-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体;重组质粒转染293T细胞,通过实时定量PCR检测筛选出干扰效果最佳的TNF-α-siRNA;筛选出的pSIH-siRNA、pSIH-negative分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成慢病毒;慢病毒感染BV-2细胞和星形胶质细胞,采用RT-PCR以及Elisa检测TNF-α-siRNA的沉默效果. 结果 成功构建携带TNF-α-siRNA的慢病毒载体,滴度达2×108 ifu/L;慢病毒感染BV-2和星形胶质细胞,表达GFP且可下调TN-a表达. 结论 TNF-α-siRNA能明显下调TNF-α的表达,为研究和治疗神经变性疾病以及TNF-α相关疾病提供了有力的工具.
目的 為探討TNF-α在C型Niemann-Pick病(NPC)神經變性中的作用,構建攜帶小鼠TNFa-siRNA的慢病毒載體併進行體外研究. 方法 設計3箇TNF-α-siRNA序列和1箇無關對照序列,剋隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA載體;重組質粒轉染293T細胞,通過實時定量PCR檢測篩選齣榦擾效果最佳的TNF-α-siRNA;篩選齣的pSIH-siRNA、pSIH-negative分彆與慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞生成慢病毒;慢病毒感染BV-2細胞和星形膠質細胞,採用RT-PCR以及Elisa檢測TNF-α-siRNA的沉默效果. 結果 成功構建攜帶TNF-α-siRNA的慢病毒載體,滴度達2×108 ifu/L;慢病毒感染BV-2和星形膠質細胞,錶達GFP且可下調TN-a錶達. 結論 TNF-α-siRNA能明顯下調TNF-α的錶達,為研究和治療神經變性疾病以及TNF-α相關疾病提供瞭有力的工具.
목적 위탐토TNF-α재C형Niemann-Pick병(NPC)신경변성중적작용,구건휴대소서TNFa-siRNA적만병독재체병진행체외연구. 방법 설계3개TNF-α-siRNA서렬화1개무관대조서렬,극륭도매절적pSIH1-H1-copGFP siRNA재체;중조질립전염293T세포,통과실시정량PCR검측사선출간우효과최가적TNF-α-siRNA;사선출적pSIH-siRNA、pSIH-negative분별여만병독포장질립공전염293T세포생성만병독;만병독감염BV-2세포화성형효질세포,채용RT-PCR이급Elisa검측TNF-α-siRNA적침묵효과. 결과 성공구건휴대TNF-α-siRNA적만병독재체,적도체2×108 ifu/L;만병독감염BV-2화성형효질세포,표체GFP차가하조TN-a표체. 결론 TNF-α-siRNA능명현하조TNF-α적표체,위연구화치료신경변성질병이급TNF-α상관질병제공료유력적공구.
