农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
4期
356-361
,共6页
于彩虹%田少亭%路兴波%李凡%杨淑珂%孙红炜
于綵虹%田少亭%路興波%李凡%楊淑珂%孫紅煒
우채홍%전소정%로흥파%리범%양숙가%손홍위
转植酸酶基因玉米%定性PCR%定量PCR%zSSIIb%植酸酶基因(phyA2)
轉植痠酶基因玉米%定性PCR%定量PCR%zSSIIb%植痠酶基因(phyA2)
전식산매기인옥미%정성PCR%정량PCR%zSSIIb%식산매기인(phyA2)
转植酸酶基因玉米检测是对转植酸酶基因玉米释放进行有效监管的重要前提和技术支撑.本研究根据转植酸酶基因玉米(Zea mays)外源植酸酶基因phyA2序列设计基因特异性引物,进行了定性、定量PCR检测.定性结果显示,该引物可有效检测植酸酶玉米中phyA2基因,而在其他不含植酸酶基因的材料中则检测不到相应基因,表明该引物具有很高的特异性.以玉米内标准基因玉米淀粉合酶异构体zSTSII-2基因(zSSIIb)和植酸酶基因phyA2为对象,进行SYBR Green Ⅰ染料法荧光定量PCR反应,绘制2种基因扩增循环数-拷贝数标准曲线图,根据混合样品中(zSSIIb)和植酸酶基因phyA2的拷贝数计算样品中的转基因含量,并做熔解曲线分析.结果表明,zSSIIb和phyA2标准曲线相关系数分别为0.998和0.995,相关性较好,两个基因的熔解曲线均呈单峰型,表明引物特异性较强,混合玉米样品(植酸酶玉米含量分别为1%、0.5%和0.1%)中植酸酶玉米含量分别为1.1%、0.54%和0.17%,实测值与理论值接近.本研究建立了转植酸酶基因玉米定性、定量PCR检测体系,可有效地对转植酸酶基因玉米进行检测.
轉植痠酶基因玉米檢測是對轉植痠酶基因玉米釋放進行有效鑑管的重要前提和技術支撐.本研究根據轉植痠酶基因玉米(Zea mays)外源植痠酶基因phyA2序列設計基因特異性引物,進行瞭定性、定量PCR檢測.定性結果顯示,該引物可有效檢測植痠酶玉米中phyA2基因,而在其他不含植痠酶基因的材料中則檢測不到相應基因,錶明該引物具有很高的特異性.以玉米內標準基因玉米澱粉閤酶異構體zSTSII-2基因(zSSIIb)和植痠酶基因phyA2為對象,進行SYBR Green Ⅰ染料法熒光定量PCR反應,繪製2種基因擴增循環數-拷貝數標準麯線圖,根據混閤樣品中(zSSIIb)和植痠酶基因phyA2的拷貝數計算樣品中的轉基因含量,併做鎔解麯線分析.結果錶明,zSSIIb和phyA2標準麯線相關繫數分彆為0.998和0.995,相關性較好,兩箇基因的鎔解麯線均呈單峰型,錶明引物特異性較彊,混閤玉米樣品(植痠酶玉米含量分彆為1%、0.5%和0.1%)中植痠酶玉米含量分彆為1.1%、0.54%和0.17%,實測值與理論值接近.本研究建立瞭轉植痠酶基因玉米定性、定量PCR檢測體繫,可有效地對轉植痠酶基因玉米進行檢測.
전식산매기인옥미검측시대전식산매기인옥미석방진행유효감관적중요전제화기술지탱.본연구근거전식산매기인옥미(Zea mays)외원식산매기인phyA2서렬설계기인특이성인물,진행료정성、정량PCR검측.정성결과현시,해인물가유효검측식산매옥미중phyA2기인,이재기타불함식산매기인적재료중칙검측불도상응기인,표명해인물구유흔고적특이성.이옥미내표준기인옥미정분합매이구체zSTSII-2기인(zSSIIb)화식산매기인phyA2위대상,진행SYBR Green Ⅰ염료법형광정량PCR반응,회제2충기인확증순배수-고패수표준곡선도,근거혼합양품중(zSSIIb)화식산매기인phyA2적고패수계산양품중적전기인함량,병주용해곡선분석.결과표명,zSSIIb화phyA2표준곡선상관계수분별위0.998화0.995,상관성교호,량개기인적용해곡선균정단봉형,표명인물특이성교강,혼합옥미양품(식산매옥미함량분별위1%、0.5%화0.1%)중식산매옥미함량분별위1.1%、0.54%화0.17%,실측치여이론치접근.본연구건립료전식산매기인옥미정성、정량PCR검측체계,가유효지대전식산매기인옥미진행검측.