农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2012年
8期
901-906
,共6页
王丛梅%郭豫杰%李宏基%韩立强%李奎%杨国宇
王叢梅%郭豫傑%李宏基%韓立彊%李奎%楊國宇
왕총매%곽예걸%리굉기%한립강%리규%양국우
猪%SPOT14%原核表达%纯化
豬%SPOT14%原覈錶達%純化
저%SPOT14%원핵표체%순화
甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOT14,THRSP)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOT14基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOT14( GenBank登录号:JF_951726)的ORF片段与表达载体pET-28α(+)进行重组,获得的重组子pET-28α(+)-S14,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1 mmol/L IPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHis Ni-NTA纯化柱纯化后,采用Western blot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET-28α(+)-S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOT14基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.
甲狀腺激素應答基因(thyroid hormone responsive SPOT14,THRSP)是受甲狀腺激素誘導錶達的覈內基因,參與脂肪閤成代謝途徑限速酶的轉錄調控,對動物脂肪生成具有重要的調控作用.為進一步研究豬SPOT14基因所編碼蛋白質的生物學功能,本實驗將豬SPOT14( GenBank登錄號:JF_951726)的ORF片段與錶達載體pET-28α(+)進行重組,穫得的重組子pET-28α(+)-S14,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受態細胞,重組菌經IPTG誘導,通過SDS-PAGE分析顯示,目的蛋白分子量約為20.91kD,且主要以包涵體形式存在,最佳誘導條件是37℃1 mmol/L IPTG誘導5h.將穫得的包涵體用6xHis Ni-NTA純化柱純化後,採用Western blot進一步檢測到瞭21kD目的蛋白的錶達.重組質粒pET-28α(+)-S14在大腸桿菌BL21(DE3)中成功地得到瞭錶達,不僅為SPOT14基因生物學功能的研究,而且為進一步研究S14蛋白功能,瞭解脂肪代謝調控機製提供瞭基礎資料.
갑상선격소응답기인(thyroid hormone responsive SPOT14,THRSP)시수갑상선격소유도표체적핵내기인,삼여지방합성대사도경한속매적전록조공,대동물지방생성구유중요적조공작용.위진일보연구저SPOT14기인소편마단백질적생물학공능,본실험장저SPOT14( GenBank등록호:JF_951726)적ORF편단여표체재체pET-28α(+)진행중조,획득적중조자pET-28α(+)-S14,전화대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)감수태세포,중조균경IPTG유도,통과SDS-PAGE분석현시,목적단백분자량약위20.91kD,차주요이포함체형식존재,최가유도조건시37℃1 mmol/L IPTG유도5h.장획득적포함체용6xHis Ni-NTA순화주순화후,채용Western blot진일보검측도료21kD목적단백적표체.중조질립pET-28α(+)-S14재대장간균BL21(DE3)중성공지득도료표체,불부위SPOT14기인생물학공능적연구,이차위진일보연구S14단백공능,료해지방대사조공궤제제공료기출자료.
