中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2007年
6期
417-421
,共5页
陈敏%彭明利%石庆凤%任红
陳敏%彭明利%石慶鳳%任紅
진민%팽명리%석경봉%임홍
肝炎病毒%乙型%转染%HLA抗原%MHCⅠ类链相关基因
肝炎病毒%乙型%轉染%HLA抗原%MHCⅠ類鏈相關基因
간염병독%을형%전염%HLA항원%MHCⅠ류련상관기인
目的 以双拷贝HBV全基因质粒pEcob6转染非癌性肝源细胞株L02细胞建立有HBV分泌的细胞转染模型,通过检测细胞表面HLA-A,B,C及MHC Ⅰ类链相关基因(MIC)A/B分子,分析HBV对肝细胞HLA-A,B,C和MICA/B表达的影响.方法 用EcoR Ⅰ酶切掉pEcob6的HBV基因并连接,构建无HBV基因的对照空质粒;用脂质体法以pEcob6或空质粒与pcDNA3.1-neo共转染L02细胞株,筛选抗性细胞株并稳定传代;用Abbott EIA试剂和免疫荧光法检测细胞上清液和(或)细胞的HBsAg、HBcAg和HBeAg表达,实时荧光定量PCR检测HBV DNA含量;用流式细胞仪检测细胞表面HLA-A,B,C和MICA/B分子的表达,分析两种分子表达的变化.结果 经G418抗性克隆筛选,pEcob6稳定转染细胞株(L02-HBV)的上清液HBsAg和HBeAg可达24.78(S/N)和4.117(S/N),HBV DNA为9.67×104拷贝/ml;而对照空质粒转染细胞株(L02-mock)和L02的表达均为阴性.共聚焦显微镜观察,L02-HBV细胞内的HBsAg强表达于细胞质内,而HBcAg弱表达于胞核或胞质内.流式细胞检测结果显示,L02和L02-mock细胞有HLA-A,B,C的表达,基本无MICA/B的表达,L02-HBV细胞HLA-A,B,C和MICA/B的表达均增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 以HBV全基因质粒转染L02细胞经筛选、克隆、传代,可获得有HBV相关抗原表达及HBV DNA分泌的细胞模型.HBV基因的转录或复制可增强肝细胞株L02的HLA-A,B,C及MICA/B的表达,可能与肝细胞的免疫损伤有关.
目的 以雙拷貝HBV全基因質粒pEcob6轉染非癌性肝源細胞株L02細胞建立有HBV分泌的細胞轉染模型,通過檢測細胞錶麵HLA-A,B,C及MHC Ⅰ類鏈相關基因(MIC)A/B分子,分析HBV對肝細胞HLA-A,B,C和MICA/B錶達的影響.方法 用EcoR Ⅰ酶切掉pEcob6的HBV基因併連接,構建無HBV基因的對照空質粒;用脂質體法以pEcob6或空質粒與pcDNA3.1-neo共轉染L02細胞株,篩選抗性細胞株併穩定傳代;用Abbott EIA試劑和免疫熒光法檢測細胞上清液和(或)細胞的HBsAg、HBcAg和HBeAg錶達,實時熒光定量PCR檢測HBV DNA含量;用流式細胞儀檢測細胞錶麵HLA-A,B,C和MICA/B分子的錶達,分析兩種分子錶達的變化.結果 經G418抗性剋隆篩選,pEcob6穩定轉染細胞株(L02-HBV)的上清液HBsAg和HBeAg可達24.78(S/N)和4.117(S/N),HBV DNA為9.67×104拷貝/ml;而對照空質粒轉染細胞株(L02-mock)和L02的錶達均為陰性.共聚焦顯微鏡觀察,L02-HBV細胞內的HBsAg彊錶達于細胞質內,而HBcAg弱錶達于胞覈或胞質內.流式細胞檢測結果顯示,L02和L02-mock細胞有HLA-A,B,C的錶達,基本無MICA/B的錶達,L02-HBV細胞HLA-A,B,C和MICA/B的錶達均增彊,差異有統計學意義(P＜0.05).結論 以HBV全基因質粒轉染L02細胞經篩選、剋隆、傳代,可穫得有HBV相關抗原錶達及HBV DNA分泌的細胞模型.HBV基因的轉錄或複製可增彊肝細胞株L02的HLA-A,B,C及MICA/B的錶達,可能與肝細胞的免疫損傷有關.
목적 이쌍고패HBV전기인질립pEcob6전염비암성간원세포주L02세포건립유HBV분비적세포전염모형,통과검측세포표면HLA-A,B,C급MHC Ⅰ류련상관기인(MIC)A/B분자,분석HBV대간세포HLA-A,B,C화MICA/B표체적영향.방법 용EcoR Ⅰ매절도pEcob6적HBV기인병련접,구건무HBV기인적대조공질립;용지질체법이pEcob6혹공질립여pcDNA3.1-neo공전염L02세포주,사선항성세포주병은정전대;용Abbott EIA시제화면역형광법검측세포상청액화(혹)세포적HBsAg、HBcAg화HBeAg표체,실시형광정량PCR검측HBV DNA함량;용류식세포의검측세포표면HLA-A,B,C화MICA/B분자적표체,분석량충분자표체적변화.결과 경G418항성극륭사선,pEcob6은정전염세포주(L02-HBV)적상청액HBsAg화HBeAg가체24.78(S/N)화4.117(S/N),HBV DNA위9.67×104고패/ml;이대조공질립전염세포주(L02-mock)화L02적표체균위음성.공취초현미경관찰,L02-HBV세포내적HBsAg강표체우세포질내,이HBcAg약표체우포핵혹포질내.류식세포검측결과현시,L02화L02-mock세포유HLA-A,B,C적표체,기본무MICA/B적표체,L02-HBV세포HLA-A,B,C화MICA/B적표체균증강,차이유통계학의의(P＜0.05).결론 이HBV전기인질립전염L02세포경사선、극륭、전대,가획득유HBV상관항원표체급HBV DNA분비적세포모형.HBV기인적전록혹복제가증강간세포주L02적HLA-A,B,C급MICA/B적표체,가능여간세포적면역손상유관.
