中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
3期
254-257
,共4页
杨恒%曹三杰%黄小波%文心田%秦学远
楊恆%曹三傑%黃小波%文心田%秦學遠
양항%조삼걸%황소파%문심전%진학원
猪传染性胃肠炎病毒%S基因%N基因%构建%真核表达
豬傳染性胃腸炎病毒%S基因%N基因%構建%真覈錶達
저전염성위장염병독%S기인%N기인%구건%진핵표체
采用RT-PCR扩增猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)SC-H株S基因5′端主要抗原位点片段和N基因,插入pMD19-T载体,经酶切与测序鉴定后,构建重组质粒19T-N与19T-S.从T载体上将S、N基因切下,以亚克隆方法插入真核表达载体pVAX1,构建嵌合表达S、N基因的重组质粒pVAX-S-N.对重组质粒PCR与酶切鉴定后,以脂质体转染法转染COS7细胞,间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况.结果表明,重组质粒构建正确且在COS7细胞中得到表达,转染的细胞呈现特异性荧光.真核表达质粒pVAX-S-N的成功构建为进一步研究TGEV核酸疫苗奠定了物质基础.
採用RT-PCR擴增豬傳染性腸胃炎病毒(TGEV)SC-H株S基因5′耑主要抗原位點片段和N基因,插入pMD19-T載體,經酶切與測序鑒定後,構建重組質粒19T-N與19T-S.從T載體上將S、N基因切下,以亞剋隆方法插入真覈錶達載體pVAX1,構建嵌閤錶達S、N基因的重組質粒pVAX-S-N.對重組質粒PCR與酶切鑒定後,以脂質體轉染法轉染COS7細胞,間接免疫熒光檢測轉染後細胞外源基因的錶達情況.結果錶明,重組質粒構建正確且在COS7細胞中得到錶達,轉染的細胞呈現特異性熒光.真覈錶達質粒pVAX-S-N的成功構建為進一步研究TGEV覈痠疫苗奠定瞭物質基礎.
채용RT-PCR확증저전염성장위염병독(TGEV)SC-H주S기인5′단주요항원위점편단화N기인,삽입pMD19-T재체,경매절여측서감정후,구건중조질립19T-N여19T-S.종T재체상장S、N기인절하,이아극륭방법삽입진핵표체재체pVAX1,구건감합표체S、N기인적중조질립pVAX-S-N.대중조질립PCR여매절감정후,이지질체전염법전염COS7세포,간접면역형광검측전염후세포외원기인적표체정황.결과표명,중조질립구건정학차재COS7세포중득도표체,전염적세포정현특이성형광.진핵표체질립pVAX-S-N적성공구건위진일보연구TGEV핵산역묘전정료물질기출.