生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2009年
8期
109-113
,共5页
陈利春%汪凌云%孙玉秀%陈兵%徐从贞%鲁云霞
陳利春%汪凌雲%孫玉秀%陳兵%徐從貞%魯雲霞
진리춘%왕릉운%손옥수%진병%서종정%로운하
pET28a(+)-hAChRα1-210%IPTG%Ni2+亲和层析%PEG8000%EMAG
pET28a(+)-hAChRα1-210%IPTG%Ni2+親和層析%PEG8000%EMAG
pET28a(+)-hAChRα1-210%IPTG%Ni2+친화층석%PEG8000%EMAG
在已建立的重组人乙酰胆碱受体表达质粒的基础上进一步优化试验条件,初步应用于ELISA分析实验性重症肌无力模型(EAMG)中抗体的滴度.取构建好的pET28a(+)-hAChRα1-210经小规模诱导,确定IPTG诱导的最佳浓度为0.006 mmol/L,最佳时间为5 h,最佳温度为37℃;大规模诱导培养后离心,超声得到菌体沉淀,1 mol/L尿素洗涤后8 mol/L尿素溶解,过Ni2+亲和层析柱,紫外吸收及Folin酚法确定表达量较多而蛋白最纯的4℃透析过夜,PEG8000浓缩后免疫雌性近交系Lewis鼠构建EAMG,ELISA检测分析模型大鼠血清中抗体的效价.结果表明,制备了大量较纯的rhAChR,并成功应用于ELISA法分析EAMG模型中抗体的滴度.因此,获得的纯化rhAChR可用于构建EAMG模型及鉴定.
在已建立的重組人乙酰膽堿受體錶達質粒的基礎上進一步優化試驗條件,初步應用于ELISA分析實驗性重癥肌無力模型(EAMG)中抗體的滴度.取構建好的pET28a(+)-hAChRα1-210經小規模誘導,確定IPTG誘導的最佳濃度為0.006 mmol/L,最佳時間為5 h,最佳溫度為37℃;大規模誘導培養後離心,超聲得到菌體沉澱,1 mol/L尿素洗滌後8 mol/L尿素溶解,過Ni2+親和層析柱,紫外吸收及Folin酚法確定錶達量較多而蛋白最純的4℃透析過夜,PEG8000濃縮後免疫雌性近交繫Lewis鼠構建EAMG,ELISA檢測分析模型大鼠血清中抗體的效價.結果錶明,製備瞭大量較純的rhAChR,併成功應用于ELISA法分析EAMG模型中抗體的滴度.因此,穫得的純化rhAChR可用于構建EAMG模型及鑒定.
재이건립적중조인을선담감수체표체질립적기출상진일보우화시험조건,초보응용우ELISA분석실험성중증기무력모형(EAMG)중항체적적도.취구건호적pET28a(+)-hAChRα1-210경소규모유도,학정IPTG유도적최가농도위0.006 mmol/L,최가시간위5 h,최가온도위37℃;대규모유도배양후리심,초성득도균체침정,1 mol/L뇨소세조후8 mol/L뇨소용해,과Ni2+친화층석주,자외흡수급Folin분법학정표체량교다이단백최순적4℃투석과야,PEG8000농축후면역자성근교계Lewis서구건EAMG,ELISA검측분석모형대서혈청중항체적효개.결과표명,제비료대량교순적rhAChR,병성공응용우ELISA법분석EAMG모형중항체적적도.인차,획득적순화rhAChR가용우구건EAMG모형급감정.
