中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2012年
7期
563-567
,共5页
德艳艳%姜志刚%牛思博%孙刚%于力
德豔豔%薑誌剛%牛思博%孫剛%于力
덕염염%강지강%우사박%손강%우력
非典型cpb2基因%A型产气荚膜梭菌%重组α毒素%重组非典型β2毒素
非典型cpb2基因%A型產氣莢膜梭菌%重組α毒素%重組非典型β2毒素
비전형cpb2기인%A형산기협막사균%중조α독소%중조비전형β2독소
为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1194bp的α毒素编码基因(cpa)和795bp的β2毒素编码基因(cpb2).经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1％～98.9％,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7％.这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因.同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验.结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击.表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用.
為驗證重組α毒素對攜帶非典型cpb2基因的A型產氣莢膜梭菌的免疫保護性,本研究應用PCR技術,從某牛場牛源A型產氣莢膜梭菌G1分離株中擴增齣1194bp的α毒素編碼基因(cpa)和795bp的β2毒素編碼基因(cpb2).經BLAST分析顯示,G1分離株攜帶的cpb2基因與14箇菌株的非典型cpb2基因的氨基痠序列同源性為95.1％～98.9％,與典型cpb2基因(L77695)的氨基痠序列同源性為61.7％.這錶明,G1的cpb2基因為非典型cpb2基因.同時分彆將cpa和cpb2基因擴增產物剋隆于原覈錶達載體中,構建重組錶達質粒pET-a和pET-b2,重組菌經IPTG誘導錶達重組蛋白,將其純化後單獨及聯閤免疫小鼠進行免疫保護試驗.結果顯示,單獨免疫重組α毒素蛋白組以及聯閤免疫重組β2毒素蛋白組的小鼠,均可以牴抗至少6倍最小緻死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻擊,也可以完全牴抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻擊.錶明,重組α毒素蛋白對含有及不含有非典型β2毒素的A型產氣莢膜梭菌均具有良好的免疫保護作用.
위험증중조α독소대휴대비전형cpb2기인적A형산기협막사균적면역보호성,본연구응용PCR기술,종모우장우원A형산기협막사균G1분리주중확증출1194bp적α독소편마기인(cpa)화795bp적β2독소편마기인(cpb2).경BLAST분석현시,G1분리주휴대적cpb2기인여14개균주적비전형cpb2기인적안기산서렬동원성위95.1％～98.9％,여전형cpb2기인(L77695)적안기산서렬동원성위61.7％.저표명,G1적cpb2기인위비전형cpb2기인.동시분별장cpa화cpb2기인확증산물극륭우원핵표체재체중,구건중조표체질립pET-a화pET-b2,중조균경IPTG유도표체중조단백,장기순화후단독급연합면역소서진행면역보호시험.결과현시,단독면역중조α독소단백조이급연합면역중조β2독소단백조적소서,균가이저항지소6배최소치사량(MLD)적G1외독소(포함α독소화비전형β2독소)적공격,야가이완전저항지소6 MLD적G2외독소(불포함β2독소)적공격.표명,중조α독소단백대함유급불함유비전형β2독소적A형산기협막사균균구유량호적면역보호작용.
