中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2006年
2期
76-79
,共4页
于德敏%张欣欣%张东华%宋建华%陆志檬%詹勤%姜节洪%陈新文
于德敏%張訢訢%張東華%宋建華%陸誌檬%詹勤%薑節洪%陳新文
우덕민%장흔흔%장동화%송건화%륙지몽%첨근%강절홍%진신문
肝炎病毒,乙型%变异(遗传学)%杆状病毒科%基因,病毒
肝炎病毒,乙型%變異(遺傳學)%桿狀病毒科%基因,病毒
간염병독,을형%변이(유전학)%간상병독과%기인,병독
目的构建乙型肝炎病毒(HBV)中国株及其拉米夫定耐药相关变异株的重组杆状病毒.方法将1.2倍HBV基因组(血清adr型、基因C型)连接至杆状病毒的转移载体pFastBacI上,然后转化入DH10Bac菌株中,在细菌内的辅助质粒辅助作用下与杆状病毒基因组Bacmid发生位点特异性转座,形成含有HBV基因组的重组Bacmid,转染昆虫sf9细胞后,包装产生HBV重组杆状病毒vAcHBVc.采用连续聚合酶链反应(PCR)引入方法进行定点突变,构建YVDD变异株质粒,并按照上述方法构建HBV YVDD变异株重组杆状病毒vAcHBVYVDD,扩增并滴定.为便于观察重组杆状病毒的转染和扩增效率及病毒滴度测定,同时构建了含绿色荧光蛋白(GFP)的HBV重组杆状病毒vAcGFPHBVc.结果 HBV野毒株和变异株重组杆状病毒均构建成功,通过免疫空斑及TCID50定量测定病毒滴度为106～108pfu/ml左右.结论应用Bac to Bac杆状病毒表达系统可有效快速地构建HBV C型重组杆状病毒,以用于HBV体外复制系统的建立,为HBV野毒株及变异株生物学特性的研究及抗病毒药物的筛选提供技术平台.
目的構建乙型肝炎病毒(HBV)中國株及其拉米伕定耐藥相關變異株的重組桿狀病毒.方法將1.2倍HBV基因組(血清adr型、基因C型)連接至桿狀病毒的轉移載體pFastBacI上,然後轉化入DH10Bac菌株中,在細菌內的輔助質粒輔助作用下與桿狀病毒基因組Bacmid髮生位點特異性轉座,形成含有HBV基因組的重組Bacmid,轉染昆蟲sf9細胞後,包裝產生HBV重組桿狀病毒vAcHBVc.採用連續聚閤酶鏈反應(PCR)引入方法進行定點突變,構建YVDD變異株質粒,併按照上述方法構建HBV YVDD變異株重組桿狀病毒vAcHBVYVDD,擴增併滴定.為便于觀察重組桿狀病毒的轉染和擴增效率及病毒滴度測定,同時構建瞭含綠色熒光蛋白(GFP)的HBV重組桿狀病毒vAcGFPHBVc.結果 HBV野毒株和變異株重組桿狀病毒均構建成功,通過免疫空斑及TCID50定量測定病毒滴度為106～108pfu/ml左右.結論應用Bac to Bac桿狀病毒錶達繫統可有效快速地構建HBV C型重組桿狀病毒,以用于HBV體外複製繫統的建立,為HBV野毒株及變異株生物學特性的研究及抗病毒藥物的篩選提供技術平檯.
목적구건을형간염병독(HBV)중국주급기랍미부정내약상관변이주적중조간상병독.방법장1.2배HBV기인조(혈청adr형、기인C형)련접지간상병독적전이재체pFastBacI상,연후전화입DH10Bac균주중,재세균내적보조질립보조작용하여간상병독기인조Bacmid발생위점특이성전좌,형성함유HBV기인조적중조Bacmid,전염곤충sf9세포후,포장산생HBV중조간상병독vAcHBVc.채용련속취합매련반응(PCR)인입방법진행정점돌변,구건YVDD변이주질립,병안조상술방법구건HBV YVDD변이주중조간상병독vAcHBVYVDD,확증병적정.위편우관찰중조간상병독적전염화확증효솔급병독적도측정,동시구건료함록색형광단백(GFP)적HBV중조간상병독vAcGFPHBVc.결과 HBV야독주화변이주중조간상병독균구건성공,통과면역공반급TCID50정량측정병독적도위106～108pfu/ml좌우.결론응용Bac to Bac간상병독표체계통가유효쾌속지구건HBV C형중조간상병독,이용우HBV체외복제계통적건립,위HBV야독주급변이주생물학특성적연구급항병독약물적사선제공기술평태.
