目的 探讨31P磁共振波谱分析(31P MRS)技术监测AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒基因转导治疗兔VX2肝肿瘤的可行性.方法 19只新西兰大白兔,随机取1只麻醉后,取1 mlVX2瘤细胞悬液(1×107个/ml)注射于兔后腿外侧肌肉.待肿瘤长到鸡蛋大时,切开肿瘤,剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的组织块,将组织块以开腹包埋法接种到18只大白兔肝脏中,超声监测肿瘤的生长情况,取肿瘤组织,行HE染色.18只大白兔随机分为治疗组(6只)、对照组(6只)和空白组(6只),经耳缘静脉分别注射等量的重组腺病毒AdCMVIL12-IRES-CKb颗粒(5×1012粒/kg)、AdCMV-Empty颗粒(5×1012粒/kg)和等渗盐水,注射处理后,肌酸水溶液饲养5 d行31pMRS扫描.采用免疫组织化学和酶联免疫吸附法检测各组白细胞介素12(IL-12)水平,Western blot 法检测脑型肌酸激酶(CKB)水平,超声法检测注射处理前后肿瘤的大小.采用统计软件SPSS17.0,通过t检验、单因素方差分析、LSD法作统计学处理.结果 肿瘤接种后15 d左右,直径增至1.5～1.7 cm,彩色多普勒超声检查血流成像显示肿瘤周边可见供血小动脉直通肿瘤内部.兔肝脏肿瘤模型表面可见突出的瘤体,质地偏硬,标本切面见肿瘤组织呈灰白色、鱼肉状,与周围正常肝组织分界欠清楚.HE染色显示肿瘤呈浸润性生长,可见明显异型性.治疗组、空白组和对照组注射处理前、后肿瘤直径分别为(1.63±0.04)cm和(1.62±0.03)cm、(1.59±0.05)cm和(1.84±0.11)cm、(1.60±0.02)cm和(2.07±0.12)cm,与注射处理前比较,空白组和对照组大白兔肿瘤直径增大,t值分别为-5.291、-9.475,P值均＜0.05,差异有统计学意义,治疗组注射处理前后肿瘤直径差异无统计学意义.兔肝肿瘤经AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒治疗后,肝组织内IL-12相关信号获得表达,但对照组、空白组未见IL-12相关信号表达;治疗组、空白组、对照组大白兔血清IL-12的浓度分别为(65.96±3.67)Pg/ml、(1.83±0.81)pg/ml、(1.60±0.76)Pg/ml,与对照组和空白组比较,治疗组IL-12浓度高,t值分别为48.893和36.548,P＜0.01,差异有统计学意义;对照组与空白组IL-12水平相比较,差异无统计学意义.治疗组肝组织CKB获得表达,但空白组和对照组未见CKB表达.与注射处理前比较,治疗组注射处理后有异常增高的典型的Pcr峰.治疗组、对照组、空白组注射处理前后的Pcr值分别为(0.23±0.14)mmol/L和(0.88±0.52)mmol/L;(0.69±0.21)mmol/L和(0.28±0.29)mmol/L;(0.19±0.19)mmol/L和(0.25±0.36)mmol/L,与处理前比较,治疗组注射处理后Pcr值增大,对照组注射处理后Pcr值减少,t值分别为-2.629、3.505,P值均＜0.05,差异有统计学意义.空白组注射处理前后Pcr值差异无统计学意义.3组大白兔注射处理前后Pcr值之差的单因素方差分析结果显示,F=6.235,P＜0.05.采用LSD法对注射处理前后3组Pcr差值进行两两比较,治疗组与对照组及空白组比较,P=0.004和0.049,差异均有统计学意义;对照组与空白组间差异无统计学意义.结论 兔肝脏肿瘤模型的建立是成功的.肝内CKB活性可预测IL-12的表达; 31P MRS技术可用于监测AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒基因转导治疗兔VX2肝肿瘤.
目的 探討31P磁共振波譜分析(31P MRS)技術鑑測AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒基因轉導治療兔VX2肝腫瘤的可行性.方法 19隻新西蘭大白兔,隨機取1隻痳醉後,取1 mlVX2瘤細胞懸液(1×107箇/ml)註射于兔後腿外側肌肉.待腫瘤長到鷄蛋大時,切開腫瘤,剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的組織塊,將組織塊以開腹包埋法接種到18隻大白兔肝髒中,超聲鑑測腫瘤的生長情況,取腫瘤組織,行HE染色.18隻大白兔隨機分為治療組(6隻)、對照組(6隻)和空白組(6隻),經耳緣靜脈分彆註射等量的重組腺病毒AdCMVIL12-IRES-CKb顆粒(5×1012粒/kg)、AdCMV-Empty顆粒(5×1012粒/kg)和等滲鹽水,註射處理後,肌痠水溶液飼養5 d行31pMRS掃描.採用免疫組織化學和酶聯免疫吸附法檢測各組白細胞介素12(IL-12)水平,Western blot 法檢測腦型肌痠激酶(CKB)水平,超聲法檢測註射處理前後腫瘤的大小.採用統計軟件SPSS17.0,通過t檢驗、單因素方差分析、LSD法作統計學處理.結果 腫瘤接種後15 d左右,直徑增至1.5～1.7 cm,綵色多普勒超聲檢查血流成像顯示腫瘤週邊可見供血小動脈直通腫瘤內部.兔肝髒腫瘤模型錶麵可見突齣的瘤體,質地偏硬,標本切麵見腫瘤組織呈灰白色、魚肉狀,與週圍正常肝組織分界欠清楚.HE染色顯示腫瘤呈浸潤性生長,可見明顯異型性.治療組、空白組和對照組註射處理前、後腫瘤直徑分彆為(1.63±0.04)cm和(1.62±0.03)cm、(1.59±0.05)cm和(1.84±0.11)cm、(1.60±0.02)cm和(2.07±0.12)cm,與註射處理前比較,空白組和對照組大白兔腫瘤直徑增大,t值分彆為-5.291、-9.475,P值均＜0.05,差異有統計學意義,治療組註射處理前後腫瘤直徑差異無統計學意義.兔肝腫瘤經AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒治療後,肝組織內IL-12相關信號穫得錶達,但對照組、空白組未見IL-12相關信號錶達;治療組、空白組、對照組大白兔血清IL-12的濃度分彆為(65.96±3.67)Pg/ml、(1.83±0.81)pg/ml、(1.60±0.76)Pg/ml,與對照組和空白組比較,治療組IL-12濃度高,t值分彆為48.893和36.548,P＜0.01,差異有統計學意義;對照組與空白組IL-12水平相比較,差異無統計學意義.治療組肝組織CKB穫得錶達,但空白組和對照組未見CKB錶達.與註射處理前比較,治療組註射處理後有異常增高的典型的Pcr峰.治療組、對照組、空白組註射處理前後的Pcr值分彆為(0.23±0.14)mmol/L和(0.88±0.52)mmol/L;(0.69±0.21)mmol/L和(0.28±0.29)mmol/L;(0.19±0.19)mmol/L和(0.25±0.36)mmol/L,與處理前比較,治療組註射處理後Pcr值增大,對照組註射處理後Pcr值減少,t值分彆為-2.629、3.505,P值均＜0.05,差異有統計學意義.空白組註射處理前後Pcr值差異無統計學意義.3組大白兔註射處理前後Pcr值之差的單因素方差分析結果顯示,F=6.235,P＜0.05.採用LSD法對註射處理前後3組Pcr差值進行兩兩比較,治療組與對照組及空白組比較,P=0.004和0.049,差異均有統計學意義;對照組與空白組間差異無統計學意義.結論 兔肝髒腫瘤模型的建立是成功的.肝內CKB活性可預測IL-12的錶達; 31P MRS技術可用于鑑測AdCMVIL12-IRES-CKb腺病毒基因轉導治療兔VX2肝腫瘤.
목적 탐토31P자공진파보분석(31P MRS)기술감측AdCMVIL12-IRES-CKb선병독기인전도치료토VX2간종류적가행성.방법 19지신서란대백토,수궤취1지마취후,취1 mlVX2류세포현액(1×107개/ml)주사우토후퇴외측기육.대종류장도계단대시,절개종류,전성1 mm×1 mm×1 mm대소적조직괴,장조직괴이개복포매법접충도18지대백토간장중,초성감측종류적생장정황,취종류조직,행HE염색.18지대백토수궤분위치료조(6지)、대조조(6지)화공백조(6지),경이연정맥분별주사등량적중조선병독AdCMVIL12-IRES-CKb과립(5×1012립/kg)、AdCMV-Empty과립(5×1012립/kg)화등삼염수,주사처리후,기산수용액사양5 d행31pMRS소묘.채용면역조직화학화매련면역흡부법검측각조백세포개소12(IL-12)수평,Western blot 법검측뇌형기산격매(CKB)수평,초성법검측주사처리전후종류적대소.채용통계연건SPSS17.0,통과t검험、단인소방차분석、LSD법작통계학처리.결과 종류접충후15 d좌우,직경증지1.5～1.7 cm,채색다보륵초성검사혈류성상현시종류주변가견공혈소동맥직통종류내부.토간장종류모형표면가견돌출적류체,질지편경,표본절면견종류조직정회백색、어육상,여주위정상간조직분계흠청초.HE염색현시종류정침윤성생장,가견명현이형성.치료조、공백조화대조조주사처리전、후종류직경분별위(1.63±0.04)cm화(1.62±0.03)cm、(1.59±0.05)cm화(1.84±0.11)cm、(1.60±0.02)cm화(2.07±0.12)cm,여주사처리전비교,공백조화대조조대백토종류직경증대,t치분별위-5.291、-9.475,P치균＜0.05,차이유통계학의의,치료조주사처리전후종류직경차이무통계학의의.토간종류경AdCMVIL12-IRES-CKb선병독치료후,간조직내IL-12상관신호획득표체,단대조조、공백조미견IL-12상관신호표체;치료조、공백조、대조조대백토혈청IL-12적농도분별위(65.96±3.67)Pg/ml、(1.83±0.81)pg/ml、(1.60±0.76)Pg/ml,여대조조화공백조비교,치료조IL-12농도고,t치분별위48.893화36.548,P＜0.01,차이유통계학의의;대조조여공백조IL-12수평상비교,차이무통계학의의.치료조간조직CKB획득표체,단공백조화대조조미견CKB표체.여주사처리전비교,치료조주사처리후유이상증고적전형적Pcr봉.치료조、대조조、공백조주사처리전후적Pcr치분별위(0.23±0.14)mmol/L화(0.88±0.52)mmol/L;(0.69±0.21)mmol/L화(0.28±0.29)mmol/L;(0.19±0.19)mmol/L화(0.25±0.36)mmol/L,여처리전비교,치료조주사처리후Pcr치증대,대조조주사처리후Pcr치감소,t치분별위-2.629、3.505,P치균＜0.05,차이유통계학의의.공백조주사처리전후Pcr치차이무통계학의의.3조대백토주사처리전후Pcr치지차적단인소방차분석결과현시,F=6.235,P＜0.05.채용LSD법대주사처리전후3조Pcr차치진행량량비교,치료조여대조조급공백조비교,P=0.004화0.049,차이균유통계학의의;대조조여공백조간차이무통계학의의.결론 토간장종류모형적건립시성공적.간내CKB활성가예측IL-12적표체; 31P MRS기술가용우감측AdCMVIL12-IRES-CKb선병독기인전도치료토VX2간종류.
Objective To investigate the feasibility of monitoring therapeutic effect of adenovirus vector containing IL12-IRES-CKb gene on a rabbit VX2 liver tumor model by using phosphorous-31 magnetic resonance spectroscopy (31P MRS). Methods A total of 18 healthy New Zealand White rabbits were used to generate animal models by implanting VX2 tumor chips into livers through laparotomy. Tumorbearing animals were randomly divided into three groups and were injected with AdCMVIL12-IRES-CKb,AdCMV-Empty and salinerespectively via ear veins. 31P MRS scan was performed after animals were fed with creatine solution for five days. Animals were euthanized thereafter and tumors were removed for pathological examination, immunohistochemistry (IHC) staining and protein analysis (Western blot). Results The intrahepatic and seral expressions of creatine kinase (CKb) and IL- 12 were detected only in AdCMVILI2-IRES-CKb group. Tumor diameters pre- and post- treatment in three groups were 1.63 ± 0.04 vs 1.62 ±0.03 in AdCMVIL12-IRES-CKb group (P = 0.229), 1.59 ± 0.05 vs 1.84 ± 0.11 in AdCMV-Empty group (P = 0.003) and 1.60 ± 0.02 vs 2.07 ± 0.12 in saline group (P = 0.001), respectively. Pcr Changes between pre- and post- treatment among the three groups were compared (F = 6.235, P ＜ 0.05). PCr increased significantly in AdCMVIL12-IRES-CKb group as compared to AdCMV-Empty (P = 0.004) and saline group (P =0.049), whereas no change found between AdCMV-Empty and saline group (P = 0.153). Conclusion 31P MRS, an effective and non-invasive functional imaging method, can be used to monitor the therapeutic effect of adenovirus vector containing IL12-IRES-CKb gene on rabbit VX2 liver tumor model through detecting metabolic product of imaging reporter gene CKb (pCr).
