中华肾脏病杂志
中華腎髒病雜誌
중화신장병잡지
2007年
10期
646-651
,共6页
冯秀艳%卫敏江%张志刚%吴伟岚%沈加%郭慕依
馮秀豔%衛敏江%張誌剛%吳偉嵐%瀋加%郭慕依
풍수염%위민강%장지강%오위람%침가%곽모의
转化生长因子β%饰胶蛋白聚糖%丝裂原激活蛋白激酶%p21%Smad2%系膜细胞
轉化生長因子β%飾膠蛋白聚糖%絲裂原激活蛋白激酶%p21%Smad2%繫膜細胞
전화생장인자β%식효단백취당%사렬원격활단백격매%p21%Smad2%계막세포
目的 探讨饰胶蛋白聚糖(DCN)与转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾系膜细胞(MsC)生长及相关信号途径的影响.方法 经脂质体介导将DCN基因转染体外培养的大鼠肾MsC,经筛选和鉴定后,收集阳性细胞克隆的培养上清(DCN上清).采用流式细胞仪检测经TGF-β1(2 μg/L)和(或)DCN上清作用后MsC细胞周期的变化.采用Western印迹法分别检测两者单独或联合作用后,MsC磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)、磷酸化Smad2(p-Smad2)和p21蛋白表达情况.采用免疫共沉淀方法检测阳性细胞克隆上清中DCN与TGF-β1的结合情况.结果 TGF-β1或DCN上清单独作用时均可抑制MsC的增殖,G2-M期细胞数分别为对照组的81%及86.5%,而两者共同作用时G2-M期细胞数与对照组差异无统计学意义.经TGF-β1和DCN上清单独作用12 h后,p-ERK1/2表达为对照组的4.4、3.7倍和3.2、3.7倍;p-SAPK/JNK表达为对照组的2.0、1.5倍和1.9、1.5倍;而两者共同作用组p-ERK1/2和p-SAPK/JNK表达与对照组差异无统计学意义.TGF-β1单独作用12 h后,MsC p-Smad2的表达为对照组的2.6倍,而DCN单独作用组及2者联合作用组其表达与对照组差异无统计学意义.DCN单独作用12 h后p21蛋白的表达为对照组的2.6倍,而TGF-β1单独作用及2者联合作用组其表达与对照组差异无统计学意义.阳性细胞克隆上清中DCN可以直接与TGF-β1结合.结论 TGF-β1与DCN单独作用均可抑制MsC增殖及激活MAPK信号途径,但2者共同作用时其作用相互抵消.TGF-β1激活Smad信号途径作用可被DCN阻断;DCN上调p21蛋白作用可被TGF-β1阻断.2者通过不同信号分子抑制细胞生长,其作用可能与两者相互结合有关.
目的 探討飾膠蛋白聚糖(DCN)與轉化生長因子β1(TGF-β1)對大鼠腎繫膜細胞(MsC)生長及相關信號途徑的影響.方法 經脂質體介導將DCN基因轉染體外培養的大鼠腎MsC,經篩選和鑒定後,收集暘性細胞剋隆的培養上清(DCN上清).採用流式細胞儀檢測經TGF-β1(2 μg/L)和(或)DCN上清作用後MsC細胞週期的變化.採用Western印跡法分彆檢測兩者單獨或聯閤作用後,MsC燐痠化絲裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)、燐痠化Smad2(p-Smad2)和p21蛋白錶達情況.採用免疫共沉澱方法檢測暘性細胞剋隆上清中DCN與TGF-β1的結閤情況.結果 TGF-β1或DCN上清單獨作用時均可抑製MsC的增殖,G2-M期細胞數分彆為對照組的81%及86.5%,而兩者共同作用時G2-M期細胞數與對照組差異無統計學意義.經TGF-β1和DCN上清單獨作用12 h後,p-ERK1/2錶達為對照組的4.4、3.7倍和3.2、3.7倍;p-SAPK/JNK錶達為對照組的2.0、1.5倍和1.9、1.5倍;而兩者共同作用組p-ERK1/2和p-SAPK/JNK錶達與對照組差異無統計學意義.TGF-β1單獨作用12 h後,MsC p-Smad2的錶達為對照組的2.6倍,而DCN單獨作用組及2者聯閤作用組其錶達與對照組差異無統計學意義.DCN單獨作用12 h後p21蛋白的錶達為對照組的2.6倍,而TGF-β1單獨作用及2者聯閤作用組其錶達與對照組差異無統計學意義.暘性細胞剋隆上清中DCN可以直接與TGF-β1結閤.結論 TGF-β1與DCN單獨作用均可抑製MsC增殖及激活MAPK信號途徑,但2者共同作用時其作用相互牴消.TGF-β1激活Smad信號途徑作用可被DCN阻斷;DCN上調p21蛋白作用可被TGF-β1阻斷.2者通過不同信號分子抑製細胞生長,其作用可能與兩者相互結閤有關.
목적 탐토식효단백취당(DCN)여전화생장인자β1(TGF-β1)대대서신계막세포(MsC)생장급상관신호도경적영향.방법 경지질체개도장DCN기인전염체외배양적대서신MsC,경사선화감정후,수집양성세포극륭적배양상청(DCN상청).채용류식세포의검측경TGF-β1(2 μg/L)화(혹)DCN상청작용후MsC세포주기적변화.채용Western인적법분별검측량자단독혹연합작용후,MsC린산화사렬원활화단백격매(p-MAPK)、린산화Smad2(p-Smad2)화p21단백표체정황.채용면역공침정방법검측양성세포극륭상청중DCN여TGF-β1적결합정황.결과 TGF-β1혹DCN상청단독작용시균가억제MsC적증식,G2-M기세포수분별위대조조적81%급86.5%,이량자공동작용시G2-M기세포수여대조조차이무통계학의의.경TGF-β1화DCN상청단독작용12 h후,p-ERK1/2표체위대조조적4.4、3.7배화3.2、3.7배;p-SAPK/JNK표체위대조조적2.0、1.5배화1.9、1.5배;이량자공동작용조p-ERK1/2화p-SAPK/JNK표체여대조조차이무통계학의의.TGF-β1단독작용12 h후,MsC p-Smad2적표체위대조조적2.6배,이DCN단독작용조급2자연합작용조기표체여대조조차이무통계학의의.DCN단독작용12 h후p21단백적표체위대조조적2.6배,이TGF-β1단독작용급2자연합작용조기표체여대조조차이무통계학의의.양성세포극륭상청중DCN가이직접여TGF-β1결합.결론 TGF-β1여DCN단독작용균가억제MsC증식급격활MAPK신호도경,단2자공동작용시기작용상호저소.TGF-β1격활Smad신호도경작용가피DCN조단;DCN상조p21단백작용가피TGF-β1조단.2자통과불동신호분자억제세포생장,기작용가능여량자상호결합유관.
