中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
3期
232-236
,共5页
李娜%张利宁%王群%王晓燕%石永玉%刘兴田%高飞%孙汶生
李娜%張利寧%王群%王曉燕%石永玉%劉興田%高飛%孫汶生
리나%장리저%왕군%왕효연%석영옥%류흥전%고비%손문생
CD28%噬菌体展示
CD28%噬菌體展示
CD28%서균체전시
目的以噬菌体展示具有天然结构的人CD28分子胞外区同二聚体,检测其抗原性和生物活性,为CD28拮抗性类肽的筛选奠定基础.方法 RT-PCR从Jurkat细胞扩增CD28胞外区,将其克隆入噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体电转入受体菌XL1-blue,并加辅助噬菌体VCSM13,使CD28胞外区展示在噬菌体表面.以ELISA、流式细胞仪检测噬菌体展示CD28的抗原性和与B7-1的结合力.MTT法检测噬菌体展示CD28的生物活性.结果成功构建表达人CD28分子胞外区同二聚体的重组噬菌粒载体pComb3H-CD28,并以噬菌体展示系统展示CD28分子.ELISA和FCM结果显示,噬菌体展示CD28可与抗CD28抗体特异性结合,也可与Jurkat细胞表面CD28竞争结合抗CD28抗体,具有CD28抗原性.噬菌体展示CD28可与B7-1特异性结合,也可与Raji细胞表面CD80结合,具有与配体结合能力.体外生物活性实验显示,噬菌体展示CD28可抑制抗CD28抗体刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应.结论利用噬菌体展示系统成功展示CD28同源二聚体,噬菌体展示CD28具有抗原性及生物活性,为以CD28为靶点体外筛选CD28拮抗性类肽,从而防治移植排斥反应和自身免疫病奠定了基础.
目的以噬菌體展示具有天然結構的人CD28分子胞外區同二聚體,檢測其抗原性和生物活性,為CD28拮抗性類肽的篩選奠定基礎.方法 RT-PCR從Jurkat細胞擴增CD28胞外區,將其剋隆入噬菌粒載體pComb3HSS,構建的重組載體電轉入受體菌XL1-blue,併加輔助噬菌體VCSM13,使CD28胞外區展示在噬菌體錶麵.以ELISA、流式細胞儀檢測噬菌體展示CD28的抗原性和與B7-1的結閤力.MTT法檢測噬菌體展示CD28的生物活性.結果成功構建錶達人CD28分子胞外區同二聚體的重組噬菌粒載體pComb3H-CD28,併以噬菌體展示繫統展示CD28分子.ELISA和FCM結果顯示,噬菌體展示CD28可與抗CD28抗體特異性結閤,也可與Jurkat細胞錶麵CD28競爭結閤抗CD28抗體,具有CD28抗原性.噬菌體展示CD28可與B7-1特異性結閤,也可與Raji細胞錶麵CD80結閤,具有與配體結閤能力.體外生物活性實驗顯示,噬菌體展示CD28可抑製抗CD28抗體刺激的人外週血淋巴細胞增殖反應.結論利用噬菌體展示繫統成功展示CD28同源二聚體,噬菌體展示CD28具有抗原性及生物活性,為以CD28為靶點體外篩選CD28拮抗性類肽,從而防治移植排斥反應和自身免疫病奠定瞭基礎.
목적이서균체전시구유천연결구적인CD28분자포외구동이취체,검측기항원성화생물활성,위CD28길항성류태적사선전정기출.방법 RT-PCR종Jurkat세포확증CD28포외구,장기극륭입서균립재체pComb3HSS,구건적중조재체전전입수체균XL1-blue,병가보조서균체VCSM13,사CD28포외구전시재서균체표면.이ELISA、류식세포의검측서균체전시CD28적항원성화여B7-1적결합력.MTT법검측서균체전시CD28적생물활성.결과성공구건표체인CD28분자포외구동이취체적중조서균립재체pComb3H-CD28,병이서균체전시계통전시CD28분자.ELISA화FCM결과현시,서균체전시CD28가여항CD28항체특이성결합,야가여Jurkat세포표면CD28경쟁결합항CD28항체,구유CD28항원성.서균체전시CD28가여B7-1특이성결합,야가여Raji세포표면CD80결합,구유여배체결합능력.체외생물활성실험현시,서균체전시CD28가억제항CD28항체자격적인외주혈림파세포증식반응.결론이용서균체전시계통성공전시CD28동원이취체,서균체전시CD28구유항원성급생물활성,위이CD28위파점체외사선CD28길항성류태,종이방치이식배척반응화자신면역병전정료기출.
