复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2005年
4期
607-613
,共7页
黄珍玉%李军辉%王胜%张元兴%杨芃原
黃珍玉%李軍輝%王勝%張元興%楊芃原
황진옥%리군휘%왕성%장원흥%양봉원
蛋白质组%双相凝胶电泳%中国仓鼠卵巢细胞%质谱%二甲基亚砜%乙肝表面抗原
蛋白質組%雙相凝膠電泳%中國倉鼠卵巢細胞%質譜%二甲基亞砜%乙肝錶麵抗原
단백질조%쌍상응효전영%중국창서란소세포%질보%이갑기아풍%을간표면항원
在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考马斯亮蓝G-250染色,GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,测得每张图谱平均斑点数量为1 852±123,以其中一块胶为参考胶进行4块胶间的斑点匹配,其平均匹配的点数达1 326±100,平均匹配率为71.6%以上.通过分析得到18个蛋白质点在添加了DMSO后表达量有明显变化(其中12个蛋白表达量明显降低,6个蛋白表达量明显增加.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹谱图和串级质谱图,用GPS软件查询NCBI数据库进行了鉴定.鉴定结果表明,这些差异蛋白中一些是与细胞周期有关的蛋白,一些是与细胞能量代谢相关的蛋白,还有一些是与蛋白翻译后修饰有关的酶,这些结果进一步深化了对DMSO提高CHO细胞表达HBsAg的机理的理解.
在培養基中添加二甲基亞砜(DMSO)可使基因工程中國倉鼠卵巢細胞(CHO)外源蛋白乙肝錶麵抗原(HBsAg)的比生產速率提高4倍以上.為瞭進一步研究DMSO的作用機理,採用雙相凝膠電泳技術分離在培養基中添加1.5%的DMSO後CHO細胞的總蛋白,膠態攷馬斯亮藍G-250染色,GS-800凝膠掃描儀穫取凝膠圖像,併用PDQUEST軟件分析,測得每張圖譜平均斑點數量為1 852±123,以其中一塊膠為參攷膠進行4塊膠間的斑點匹配,其平均匹配的點數達1 326±100,平均匹配率為71.6%以上.通過分析得到18箇蛋白質點在添加瞭DMSO後錶達量有明顯變化(其中12箇蛋白錶達量明顯降低,6箇蛋白錶達量明顯增加.用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜測定其膠內酶解後的肽質指紋譜圖和串級質譜圖,用GPS軟件查詢NCBI數據庫進行瞭鑒定.鑒定結果錶明,這些差異蛋白中一些是與細胞週期有關的蛋白,一些是與細胞能量代謝相關的蛋白,還有一些是與蛋白翻譯後脩飾有關的酶,這些結果進一步深化瞭對DMSO提高CHO細胞錶達HBsAg的機理的理解.
재배양기중첨가이갑기아풍(DMSO)가사기인공정중국창서란소세포(CHO)외원단백을간표면항원(HBsAg)적비생산속솔제고4배이상.위료진일보연구DMSO적작용궤리,채용쌍상응효전영기술분리재배양기중첨가1.5%적DMSO후CHO세포적총단백,효태고마사량람G-250염색,GS-800응효소묘의획취응효도상,병용PDQUEST연건분석,측득매장도보평균반점수량위1 852±123,이기중일괴효위삼고효진행4괴효간적반점필배,기평균필배적점수체1 326±100,평균필배솔위71.6%이상.통과분석득도18개단백질점재첨가료DMSO후표체량유명현변화(기중12개단백표체량명현강저,6개단백표체량명현증가.용기질보조격광해석전리비행시간질보측정기효내매해후적태질지문보도화천급질보도,용GPS연건사순NCBI수거고진행료감정.감정결과표명,저사차이단백중일사시여세포주기유관적단백,일사시여세포능량대사상관적단백,환유일사시여단백번역후수식유관적매,저사결과진일보심화료대DMSO제고CHO세포표체HBsAg적궤리적리해.
