农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
77-81
,共5页
王公金%刘文华%谭晓东%徐小波%范必勤%赵伟
王公金%劉文華%譚曉東%徐小波%範必勤%趙偉
왕공금%류문화%담효동%서소파%범필근%조위
小鼠%第一极体%重组卵母细胞%体外发育
小鼠%第一極體%重組卵母細胞%體外髮育
소서%제일겁체%중조란모세포%체외발육
分别以昆明系、ICR系、C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)C14-Y01-FM131Osb系(即转绿色荧光蛋白基因小鼠,简称荧光标记小鼠)和无标记C57BL/6J系小鼠(Mus musculus)为试验动物,探索其卵母细胞第一极体核重组卵母细胞的生殖功能.超数排卵后采集小鼠卵丘卵母细胞复合体(COCs),利用链霉蛋白酶酶解法分离出第一极体(Pb Ⅰ);以形态学和台盼蓝染色相结合的方法对不同温度保存条件下COCs中PbⅠ进行活力鉴定和分级;采用显微操作术将Pb Ⅰ核供体注射到去核卵母细胞中,进一步观察重组卵母细胞体外受精和体外培养发育能力.结果表明,注射hCG后12～14 h回收的Pb Ⅰ活力最佳,4℃条件下保存48 h后Pb Ⅰ仍保持活性;117枚昆明系和ICR系小鼠重组卵母细胞经体外受精获得13枚2-细胞胚胎,38枚荧光标记小鼠的卵母细胞中有3枚卵裂成2-细胞胚胎.初步证明小鼠第一极体重组卵母细胞可体外受精和体外早期发育,为发掘和利用家畜母本基因资源提供了参考依据.
分彆以昆明繫、ICR繫、C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)C14-Y01-FM131Osb繫(即轉綠色熒光蛋白基因小鼠,簡稱熒光標記小鼠)和無標記C57BL/6J繫小鼠(Mus musculus)為試驗動物,探索其卵母細胞第一極體覈重組卵母細胞的生殖功能.超數排卵後採集小鼠卵丘卵母細胞複閤體(COCs),利用鏈黴蛋白酶酶解法分離齣第一極體(Pb Ⅰ);以形態學和檯盼藍染色相結閤的方法對不同溫度保存條件下COCs中PbⅠ進行活力鑒定和分級;採用顯微操作術將Pb Ⅰ覈供體註射到去覈卵母細胞中,進一步觀察重組卵母細胞體外受精和體外培養髮育能力.結果錶明,註射hCG後12～14 h迴收的Pb Ⅰ活力最佳,4℃條件下保存48 h後Pb Ⅰ仍保持活性;117枚昆明繫和ICR繫小鼠重組卵母細胞經體外受精穫得13枚2-細胞胚胎,38枚熒光標記小鼠的卵母細胞中有3枚卵裂成2-細胞胚胎.初步證明小鼠第一極體重組卵母細胞可體外受精和體外早期髮育,為髮掘和利用傢畜母本基因資源提供瞭參攷依據.
분별이곤명계、ICR계、C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)C14-Y01-FM131Osb계(즉전록색형광단백기인소서,간칭형광표기소서)화무표기C57BL/6J계소서(Mus musculus)위시험동물,탐색기란모세포제일겁체핵중조란모세포적생식공능.초수배란후채집소서란구란모세포복합체(COCs),이용련매단백매매해법분리출제일겁체(Pb Ⅰ);이형태학화태반람염색상결합적방법대불동온도보존조건하COCs중PbⅠ진행활력감정화분급;채용현미조작술장Pb Ⅰ핵공체주사도거핵란모세포중,진일보관찰중조란모세포체외수정화체외배양발육능력.결과표명,주사hCG후12～14 h회수적Pb Ⅰ활력최가,4℃조건하보존48 h후Pb Ⅰ잉보지활성;117매곤명계화ICR계소서중조란모세포경체외수정획득13매2-세포배태,38매형광표기소서적란모세포중유3매란렬성2-세포배태.초보증명소서제일겁체중조란모세포가체외수정화체외조기발육,위발굴화이용가축모본기인자원제공료삼고의거.
