广西农业生物科学
廣西農業生物科學
엄서농업생물과학
JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE
2008年
1期
31-36
,共6页
玉荣%赖洪敏%刘杨%韦明肯%李有志
玉榮%賴洪敏%劉楊%韋明肯%李有誌
옥영%뢰홍민%류양%위명긍%리유지
真菌%金属盐%抗性%原生质体%转化
真菌%金屬鹽%抗性%原生質體%轉化
진균%금속염%항성%원생질체%전화
我们曾分离到一株高抗多种重金属盐的微紫青霉菌(Penicillium janthinellum)菌株GXCR.本研究在该菌株中建立了基于携带苯菌灵抗性基因(Benr)的质粒pCPXBN-1、聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化体系.原生质体的产量和再生的最佳条件是酶解液中的酶浓度在0.6%～0.8%(纤维素酶∶蜗牛酶=1∶1) 、孢子萌发后培养24 h的菌体和0.05 mol/L二硫苏半糖醇(DTT)预处理.最佳转化组合条件为3×108原生质体/mL,50μg质粒DNA组合条件下,40%PEG4000,山梨糖醇(sorbitol)-三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)-氯化钙(CaCl2)缓冲液(STC)[1 mol/L sorbitol,50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.0),50 mmol/L CaCl2],室温转化20 min.在此条件下的转化效率为0.3个转化子/μg DNA.
我們曾分離到一株高抗多種重金屬鹽的微紫青黴菌(Penicillium janthinellum)菌株GXCR.本研究在該菌株中建立瞭基于攜帶苯菌靈抗性基因(Benr)的質粒pCPXBN-1、聚乙二醇(PEG)介導的原生質體轉化體繫.原生質體的產量和再生的最佳條件是酶解液中的酶濃度在0.6%～0.8%(纖維素酶∶蝸牛酶=1∶1) 、孢子萌髮後培養24 h的菌體和0.05 mol/L二硫囌半糖醇(DTT)預處理.最佳轉化組閤條件為3×108原生質體/mL,50μg質粒DNA組閤條件下,40%PEG4000,山梨糖醇(sorbitol)-三(羥甲基)氨基甲烷鹽痠鹽(Tris-HCl)-氯化鈣(CaCl2)緩遲液(STC)[1 mol/L sorbitol,50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.0),50 mmol/L CaCl2],室溫轉化20 min.在此條件下的轉化效率為0.3箇轉化子/μg DNA.
아문증분리도일주고항다충중금속염적미자청매균(Penicillium janthinellum)균주GXCR.본연구재해균주중건립료기우휴대분균령항성기인(Benr)적질립pCPXBN-1、취을이순(PEG)개도적원생질체전화체계.원생질체적산량화재생적최가조건시매해액중적매농도재0.6%～0.8%(섬유소매∶와우매=1∶1) 、포자맹발후배양24 h적균체화0.05 mol/L이류소반당순(DTT)예처리.최가전화조합조건위3×108원생질체/mL,50μg질립DNA조합조건하,40%PEG4000,산리당순(sorbitol)-삼(간갑기)안기갑완염산염(Tris-HCl)-록화개(CaCl2)완충액(STC)[1 mol/L sorbitol,50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.0),50 mmol/L CaCl2],실온전화20 min.재차조건하적전화효솔위0.3개전화자/μg DNA.
