华北国防医药
華北國防醫藥
화북국방의약
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN NORTH CHINA
2008年
4期
5-7,封2
,共4页
孙林英%刘畅%胡锋涛%刘秀丽%邵晓婷%刘端祺%谭晓华
孫林英%劉暢%鬍鋒濤%劉秀麗%邵曉婷%劉耑祺%譚曉華
손림영%류창%호봉도%류수려%소효정%류단기%담효화
受体,血管内皮生长因子%质粒%基因表达调控
受體,血管內皮生長因子%質粒%基因錶達調控
수체,혈관내피생장인자%질립%기인표체조공
目的:利用基因工程技术构建pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)重组质粒,为其应用于肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:以本实验室构建保存的pcDNA3.1 hKDR为模板,PCR扩增hKDR(Ig1-3)cDNA片段后用Nco Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后插入pmRNA IRES多克隆位点的相应位点中,经PCR、酶切和测序鉴定其序列正确性,然后用试剂盒体外转录出相应的mRNA,用脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选后通过免疫组化和Western blot检测该融合蛋白.结果:PCR、酶切和测序证实pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)构建成功,体外转录出相应的mRNA,免疫组化和Western blot检测出其蛋白表达.结论:成功构建含pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)的真核表达重组质粒,有助于进一步研究其抗肿瘤作用.
目的:利用基因工程技術構建pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)重組質粒,為其應用于腫瘤的基因治療奠定基礎.方法:以本實驗室構建保存的pcDNA3.1 hKDR為模闆,PCR擴增hKDR(Ig1-3)cDNA片段後用Nco Ⅰ和Xho Ⅰ酶切後插入pmRNA IRES多剋隆位點的相應位點中,經PCR、酶切和測序鑒定其序列正確性,然後用試劑盒體外轉錄齣相應的mRNA,用脂質體轉染COS-7細胞,經G418篩選後通過免疫組化和Western blot檢測該融閤蛋白.結果:PCR、酶切和測序證實pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)構建成功,體外轉錄齣相應的mRNA,免疫組化和Western blot檢測齣其蛋白錶達.結論:成功構建含pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)的真覈錶達重組質粒,有助于進一步研究其抗腫瘤作用.
목적:이용기인공정기술구건pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)중조질립,위기응용우종류적기인치료전정기출.방법:이본실험실구건보존적pcDNA3.1 hKDR위모판,PCR확증hKDR(Ig1-3)cDNA편단후용Nco Ⅰ화Xho Ⅰ매절후삽입pmRNA IRES다극륭위점적상응위점중,경PCR、매절화측서감정기서렬정학성,연후용시제합체외전록출상응적mRNA,용지질체전염COS-7세포,경G418사선후통과면역조화화Western blot검측해융합단백.결과:PCR、매절화측서증실pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)구건성공,체외전록출상응적mRNA,면역조화화Western blot검측출기단백표체.결론:성공구건함pmRNA IRES-hKDR(Ig1-3)적진핵표체중조질립,유조우진일보연구기항종류작용.
