泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2009年
3期
209-213
,共5页
谭晓秋%曾晓荣%白志茹%杨艳%刘智飞%陈桂兰%裴杰
譚曉鞦%曾曉榮%白誌茹%楊豔%劉智飛%陳桂蘭%裴傑
담효추%증효영%백지여%양염%류지비%진계란%배걸
瞬时外向钾通道%心肌细胞%钾通道相关蛋白2%基因克隆
瞬時外嚮鉀通道%心肌細胞%鉀通道相關蛋白2%基因剋隆
순시외향갑통도%심기세포%갑통도상관단백2%기인극륭
目的:KChIP5作为瞬时外向钾通道(Ito)最重要的辅助亚基,在调控通道基因表达和电流特性中起重要作用.本实验拟构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为研究KChIP2对Ito的调控功能奠定基础.方法:①提取人心房肌总RNA,逆转录得到cDNA;②通过特异性引物进行PCK扩增得到KChIP2编码区全长序列,亚克隆到pMD18-T载体中,得到重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2;③再设计带有酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ的特异性引物,对重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2进行PCK扩增,得到含有酶切位点的KChIP2编码区全长序列;④对含有酶切位点的KChIP2全长片段和pEGFP-c1进行HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切反应,然后进行电泳后胶回收,再进行连接和转化反应;⑤提取质粒,测序鉴定.结果:质粒测序结果与PubMed数据库KChIP2(AY026328)序列比对,同源性为99%.结论:成功构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为下一步转染实验研究KChIP2对瞬时外向钾通道的功能调控奠定了基础.
目的:KChIP5作為瞬時外嚮鉀通道(Ito)最重要的輔助亞基,在調控通道基因錶達和電流特性中起重要作用.本實驗擬構建人心房肌KChIP2基因錶達質粒,為研究KChIP2對Ito的調控功能奠定基礎.方法:①提取人心房肌總RNA,逆轉錄得到cDNA;②通過特異性引物進行PCK擴增得到KChIP2編碼區全長序列,亞剋隆到pMD18-T載體中,得到重組剋隆質粒pMD18-T-KChIP2;③再設計帶有酶切位點HindⅢ和BamH Ⅰ的特異性引物,對重組剋隆質粒pMD18-T-KChIP2進行PCK擴增,得到含有酶切位點的KChIP2編碼區全長序列;④對含有酶切位點的KChIP2全長片段和pEGFP-c1進行HindⅢ和BamH Ⅰ雙酶切反應,然後進行電泳後膠迴收,再進行連接和轉化反應;⑤提取質粒,測序鑒定.結果:質粒測序結果與PubMed數據庫KChIP2(AY026328)序列比對,同源性為99%.結論:成功構建人心房肌KChIP2基因錶達質粒,為下一步轉染實驗研究KChIP2對瞬時外嚮鉀通道的功能調控奠定瞭基礎.
목적:KChIP5작위순시외향갑통도(Ito)최중요적보조아기,재조공통도기인표체화전류특성중기중요작용.본실험의구건인심방기KChIP2기인표체질립,위연구KChIP2대Ito적조공공능전정기출.방법:①제취인심방기총RNA,역전록득도cDNA;②통과특이성인물진행PCK확증득도KChIP2편마구전장서렬,아극륭도pMD18-T재체중,득도중조극륭질립pMD18-T-KChIP2;③재설계대유매절위점HindⅢ화BamH Ⅰ적특이성인물,대중조극륭질립pMD18-T-KChIP2진행PCK확증,득도함유매절위점적KChIP2편마구전장서렬;④대함유매절위점적KChIP2전장편단화pEGFP-c1진행HindⅢ화BamH Ⅰ쌍매절반응,연후진행전영후효회수,재진행련접화전화반응;⑤제취질립,측서감정.결과:질립측서결과여PubMed수거고KChIP2(AY026328)서렬비대,동원성위99%.결론:성공구건인심방기KChIP2기인표체질립,위하일보전염실험연구KChIP2대순시외향갑통도적공능조공전정료기출.
