东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
5期
371-375
,共5页
刘素丽%鲁勇%王学军%曹荣月%刘景晶%范豪%李泰明
劉素麗%魯勇%王學軍%曹榮月%劉景晶%範豪%李泰明
류소려%로용%왕학군%조영월%류경정%범호%리태명
融合表达%速效人胰岛素类似物%单体胰岛素%药效学活性
融閤錶達%速效人胰島素類似物%單體胰島素%藥效學活性
융합표체%속효인이도소유사물%단체이도소%약효학활성
目的: 构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物(PIns),进行其性质研究.方法: 采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白(1-20aa)的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白(FKPPIns)的表达载体(pET28a-FKPPIns).此融合蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切.酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质.对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价.结果: 获得了结构为R-P-K-P-Insulin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降.结论: PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短.
目的: 構建和製備齣一種新型速效人胰島素類似物(PIns),進行其性質研究.方法: 採用加耑PCR的方法,擴增齣在天然人胰島素原N耑添加精氨痠、脯氨痠、賴氨痠、脯氨痠4箇氨基痠殘基的重構胰島素原基因片段,將其插入通用錶達載體pET28a後,再將經過改構後的硫氧還蛋白(1-20aa)的基因片段與重構胰島素原基因的5′耑通過賴氨痠連接,成功構建瞭速效人胰島素原類似物融閤蛋白(FKPPIns)的錶達載體(pET28a-FKPPIns).此融閤蛋白在大腸桿菌BL-21(DE3)中以包涵體的形式錶達,經包涵體洗滌和DEAE陰離子交換樹脂純化後進行複性、酶切.酶切產物經RP-HPLC純化後,質譜法測定其分子量;等電聚焦法測定此蛋白的等電點;凝膠過濾法測定其自身的締閤性質.對新西蘭大白兔肌肉註射純化後PIns,進行初步的藥效學評價.結果: 穫得瞭結構為R-P-K-P-Insulin的PIns純品,其等電點為7.3,自身締閤性較標準胰島素顯著下降.結論: PIns與標準人胰島素相比,起效快、達峰時間及持續時間短.
목적: 구건화제비출일충신형속효인이도소유사물(PIns),진행기성질연구.방법: 채용가단PCR적방법,확증출재천연인이도소원N단첨가정안산、포안산、뢰안산、포안산4개안기산잔기적중구이도소원기인편단,장기삽입통용표체재체pET28a후,재장경과개구후적류양환단백(1-20aa)적기인편단여중구이도소원기인적5′단통과뢰안산련접,성공구건료속효인이도소원유사물융합단백(FKPPIns)적표체재체(pET28a-FKPPIns).차융합단백재대장간균BL-21(DE3)중이포함체적형식표체,경포함체세조화DEAE음리자교환수지순화후진행복성、매절.매절산물경RP-HPLC순화후,질보법측정기분자량;등전취초법측정차단백적등전점;응효과려법측정기자신적체합성질.대신서란대백토기육주사순화후PIns,진행초보적약효학평개.결과: 획득료결구위R-P-K-P-Insulin적PIns순품,기등전점위7.3,자신체합성교표준이도소현저하강.결론: PIns여표준인이도소상비,기효쾌、체봉시간급지속시간단.
