华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
2期
1-6
,共6页
李君武%宫君原%刘鑫%叶秋萍%黄清华
李君武%宮君原%劉鑫%葉鞦萍%黃清華
리군무%궁군원%류흠%협추평%황청화
结核分枝杆菌%乙肝病毒%大包膜蛋白L基因%Esat6基因%globulin-l
結覈分枝桿菌%乙肝病毒%大包膜蛋白L基因%Esat6基因%globulin-l
결핵분지간균%을간병독%대포막단백L기인%Esat6기인%globulin-l
构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404.分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIAI300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中.构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCBI上公布序列一致.成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础.
構建包含編碼結覈桿菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物雙元錶達載體,併轉化根癌農桿菌LBA4404.分彆以質粒pPIC9K-L和結覈桿菌基因組為模闆進行PCR擴增,穫得L和Esat6基因,然後運用部分重疊聚閤酶鏈式反應擴增齣L-Esat6融閤基因片段,連接到有玉米特異性啟動子globulin-1的pEGG載體上,將G-L-Esat6融閤基因片段酶切下,連接到含有抗除草劑基因bar的雙元錶達載體pCAMBIAI300上,電擊法將重組質粒轉化到農桿菌LBA4404中.構建瞭真覈錶達重組質粒pCAMG-L-Esat6,測序分析錶明,剋隆的L和Esat6序列與NCBI上公佈序列一緻.成功構建與轉化瞭包含編碼乙肝病毒大包膜蛋白L基因和結覈桿菌Esat6基因的植物錶達載體,併將其轉化入根癌農桿菌LBA4404中,為成功研製利用轉基因植物生產抗乙肝和結覈聯閤口服疫苗奠定瞭基礎.
구건포함편마결핵간균Esat6기인화을간병독대포막단백(L단백)기인적식물쌍원표체재체,병전화근암농간균LBA4404.분별이질립pPIC9K-L화결핵간균기인조위모판진행PCR확증,획득L화Esat6기인,연후운용부분중첩취합매련식반응확증출L-Esat6융합기인편단,련접도유옥미특이성계동자globulin-1적pEGG재체상,장G-L-Esat6융합기인편단매절하,련접도함유항제초제기인bar적쌍원표체재체pCAMBIAI300상,전격법장중조질립전화도농간균LBA4404중.구건료진핵표체중조질립pCAMG-L-Esat6,측서분석표명,극륭적L화Esat6서렬여NCBI상공포서렬일치.성공구건여전화료포함편마을간병독대포막단백L기인화결핵간균Esat6기인적식물표체재체,병장기전화입근암농간균LBA4404중,위성공연제이용전기인식물생산항을간화결핵연합구복역묘전정료기출.
