CAJ | 학술논문

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的两个主要入侵发育阶段——子孢子和裂殖子的差异基因,根据已报道的子孢子与裂殖子差异的ESTs序列,应用RACE技术克隆获得了子孢子阶段差异表达的新基因全长cDNA序列,命名为ZL583.该基因全长为862 bp,开放阅读框(ORF)为486 bp,编码161个氨基酸,编码蛋白的分子量约为16.9 kD,利用生物信息学分析软件,分析新基因所编码蛋白的性质、定位、结构等特征.利用荧光定量PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段该基因的表达量进行分析显示,子孢子阶段的表达高于其他发育阶段.将ZL583克隆于pET-28a中构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,获得重组蛋白分子量约23 kD.免疫印迹分析显示该重组蛋白可与兔抗子孢子血清发生特异性反应,表明该蛋白具有较好的反应原性.该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础.
위료연구유눈애미이구충(Eimeria tenella)적량개주요입침발육계단——자포자화렬식자적차이기인,근거이보도적자포자여렬식자차이적ESTs서렬,응용RACE기술극륭획득료자포자계단차이표체적신기인전장cDNA서렬,명명위ZL583.해기인전장위862 bp,개방열독광(ORF)위486 bp,편마161개안기산,편마단백적분자량약위16.9 kD,이용생물신식학분석연건,분석신기인소편마단백적성질、정위、결구등특정.이용형광정량PCR대유눈애미이구충불동발육계단해기인적표체량진행분석현시,자포자계단적표체고우기타발육계단.장ZL583극륭우pET-28a중구건중조질립,전화대장간균BL21(DE3)후경IPTG유도표체,획득중조단백분자량약23 kD.면역인적분석현시해중조단백가여토항자포자혈청발생특이성반응,표명해단백구유교호적반응원성.해결과위진일보연구해기인적생물학공능전정기출.