植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2011年
2期
154-160
,共7页
吕典秋%刘尚武%邱彩玲%李勇%宿飞飞%王绍鹏%吕文河
呂典鞦%劉尚武%邱綵玲%李勇%宿飛飛%王紹鵬%呂文河
려전추%류상무%구채령%리용%숙비비%왕소붕%려문하
马铃薯纺锤块茎类病毒%探针%核酸斑点杂交%标记
馬鈴藷紡錘塊莖類病毒%探針%覈痠斑點雜交%標記
마령서방추괴경류병독%탐침%핵산반점잡교%표기
灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义.本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素.通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体.分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针.比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响.结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDPStar为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍.利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行.
靈敏可靠地檢測馬鈴藷紡錘塊莖類病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)對脫毒種藷的生產具有重要意義.本研究探索瞭影響覈痠雜交檢測技術的關鍵因素.通過基因剋隆技術構建瞭插有PSTVd全長單體、雙體及片段的載體.分彆以地高辛和同位素為標記物,利用PCR和轉錄標記技術製備cDNA和RNA探針.比較探針大小、標記物、標記方法、反應底物等對檢測靈敏度的影響.結果顯示,以地高辛為標記物,利用PCR標記製備的PSTVd雙體cDNA探針,在以CDPStar為底物,通過在柯達X-OMAT BT膠片進行化學髮光反應來分析結果的檢測靈敏度最高,可以檢測到0.05pg總RNA中的PSTVd,是國外報道檢測靈敏度的500倍.利用覈痠斑點雜交技術檢測PSTVd具有靈敏度高,一次可檢測樣品數量多等特點,對于大規模PSTVd檢測更加方便可行.
령민가고지검측마령서방추괴경류병독(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)대탈독충서적생산구유중요의의.본연구탐색료영향핵산잡교검측기술적관건인소.통과기인극륭기술구건료삽유PSTVd전장단체、쌍체급편단적재체.분별이지고신화동위소위표기물,이용PCR화전록표기기술제비cDNA화RNA탐침.비교탐침대소、표기물、표기방법、반응저물등대검측령민도적영향.결과현시,이지고신위표기물,이용PCR표기제비적PSTVd쌍체cDNA탐침,재이CDPStar위저물,통과재가체X-OMAT BT효편진행화학발광반응래분석결과적검측령민도최고,가이검측도0.05pg총RNA중적PSTVd,시국외보도검측령민도적500배.이용핵산반점잡교기술검측PSTVd구유령민도고,일차가검측양품수량다등특점,대우대규모PSTVd검측경가방편가행.
