中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
11期
841-844
,共4页
李印%邓国华%崔佳莹%于洋%丁睛薇%陈化兰
李印%鄧國華%崔佳瑩%于洋%丁睛薇%陳化蘭
리인%산국화%최가형%우양%정정미%진화란
H5亚型禽流感病毒%RNA聚合酶复合体%串联亲和纯化
H5亞型禽流感病毒%RNA聚閤酶複閤體%串聯親和純化
H5아형금류감병독%RNA취합매복합체%천련친화순화
为建立流感病毒RNA聚合酶的串联亲和纯化方法,本实验由鸡胚尿囊液中提取病毒核酸,经过RT-PCR和常规PCR方法扩增禽流感病毒株A/Duck/Guangxi/35/01 (H5N1)的PB1、PB2和PA的cDNA.分别将PB2基因连接于pcDNATAP载体中,PB1和PA基因连接于pcDNA3A载体中构建了pcDNA-35PB2TAP、pcDNA-35PB1和pcDNA-35PA重组质粒.将构建的真核表达重组质粒共转染293T细胞,经过串联亲和纯化方法获得流感病毒依赖RNA的RNA聚合酶复合体(RdRp).利用RNA体外合成试验验证获得的RdRp具有生物学活性.
為建立流感病毒RNA聚閤酶的串聯親和純化方法,本實驗由鷄胚尿囊液中提取病毒覈痠,經過RT-PCR和常規PCR方法擴增禽流感病毒株A/Duck/Guangxi/35/01 (H5N1)的PB1、PB2和PA的cDNA.分彆將PB2基因連接于pcDNATAP載體中,PB1和PA基因連接于pcDNA3A載體中構建瞭pcDNA-35PB2TAP、pcDNA-35PB1和pcDNA-35PA重組質粒.將構建的真覈錶達重組質粒共轉染293T細胞,經過串聯親和純化方法穫得流感病毒依賴RNA的RNA聚閤酶複閤體(RdRp).利用RNA體外閤成試驗驗證穫得的RdRp具有生物學活性.
위건립류감병독RNA취합매적천련친화순화방법,본실험유계배뇨낭액중제취병독핵산,경과RT-PCR화상규PCR방법확증금류감병독주A/Duck/Guangxi/35/01 (H5N1)적PB1、PB2화PA적cDNA.분별장PB2기인련접우pcDNATAP재체중,PB1화PA기인련접우pcDNA3A재체중구건료pcDNA-35PB2TAP、pcDNA-35PB1화pcDNA-35PA중조질립.장구건적진핵표체중조질립공전염293T세포,경과천련친화순화방법획득류감병독의뢰RNA적RNA취합매복합체(RdRp).이용RNA체외합성시험험증획득적RdRp구유생물학활성.
