CAJ | 학술논문

目的采用密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、培养、纯化及鉴定成年Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和依达拉奉联合诱导MSCs定向分化为神经元样细胞. 方法选用1月龄健康雄性Wistar大鼠,采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓中的MSCs,通过差速贴壁法反复传代培养、纯化,取第3代细胞采用流式细胞术、免疫细胞化学等方法检测MSCs的纯度,利用bFGF联合依达拉奉诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过扫描电镜、免疫细胞化学等对诱导后的细胞进行鉴定. 结果第3代MSCs经免疫细胞化学及流式细胞仪等检测,间充质干细胞特异性的标记物CD44表达阳性,不表达造血干细胞及白细胞的特异性标记物CD34、CD45,MSCs纯度高达95.5％.诱导分化后扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构；免疫细胞化学检测发现,细胞表达神经元特异性烯醇化酶( NSE),不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP),Nestin的表达随着细胞成熟而减弱. 结论密度梯度离心和差速贴壁法可获得高纯度的MSCs；依达拉奉能高效地定向诱导MSCs分化为神经元样细胞.
목적 채용밀도제도리심화차속첩벽법체외분리、배양、순화급감정성년Wistar대서골수간충질간세포(MSCs),이용감성성섬유세포생장인자(bFGF)화의체랍봉연합유도MSCs정향분화위신경원양세포. 방법 선용1월령건강웅성Wistar대서,채용Percoll분리액밀도제도리심법획취골수중적MSCs,통과차속첩벽법반복전대배양、순화,취제3대세포채용류식세포술、면역세포화학등방법검측MSCs적순도,이용bFGF연합의체랍봉유도MSCs향신경원양세포분화,병통과소묘전경、면역세포화학등대유도후적세포진행감정. 결과 제3대MSCs경면역세포화학급류식세포의등검측,간충질간세포특이성적표기물CD44표체양성,불표체조혈간세포급백세포적특이성표기물CD34、CD45,MSCs순도고체95.5％.유도분화후소묘전경검측가관찰도전형적신경원양세포결구；면역세포화학검측발현,세포표체신경원특이성희순화매( NSE),불표체효질섬유산성단백(GFAP),Nestin적표체수착세포성숙이감약. 결론 밀도제도리심화차속첩벽법가획득고순도적MSCs；의체랍봉능고효지정향유도MSCs분화위신경원양세포.