河南科技大学学报（医学版）
河南科技大學學報（醫學版）
하남과기대학학보（의학판）
JOURNAL OF HENAN UNIVERSITY OF SCIENCE & TECHNOLOGY(MEDICAL SCIENCE)
2005年
4期
241-244
,共4页
张世杰%杨书钦%赵新合%曹明瑞%李一冬%赵国强
張世傑%楊書欽%趙新閤%曹明瑞%李一鼕%趙國彊
장세걸%양서흠%조신합%조명서%리일동%조국강
乙型肝炎病毒%乙型肝炎表面抗原%人微小病毒B19%联合疫苗%原核表达
乙型肝炎病毒%乙型肝炎錶麵抗原%人微小病毒B19%聯閤疫苗%原覈錶達
을형간염병독%을형간염표면항원%인미소병독B19%연합역묘%원핵표체
目的构建乙肝表面抗原-人微小病毒B19 VP2融合蛋白的原核表达系统,并检测其表达蛋白的抗原反应性.方法用PCR扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因及B19病毒VP2基因,分别重组入pGEM-T,构建出pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2并测序分析;测序证实序列正确后,将pGEM-T-HBs中的HBs基因克隆入pQE30表达载体中,得到pQE30-HBs;再将pGEM-T-VP2中的VP2基因克隆入pQE30-HBs中,得到pQE30-HBs-VP2后转化至BL21(DE3)宿主菌中,并以IPTG诱导表达融合蛋白,以Western-blot鉴定.结果pQE30-HBs-VP2可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,Western-blot检测结果显示所表达融合蛋白均可与抗-HBs和抗-VP2结合反应.结论成功构建pQE30-HBs-VP2原核表达载体,且其表达的重组蛋白具有良好的HBsAg和VP2蛋白的双重抗原的反应原性.从而建立了表达B19和HBV的联合抗原表达系统,同时给HBV和B19病毒重组联合疫苗的研制和复合诊断试剂提供了抗原参考.
目的構建乙肝錶麵抗原-人微小病毒B19 VP2融閤蛋白的原覈錶達繫統,併檢測其錶達蛋白的抗原反應性.方法用PCR擴增乙肝錶麵抗原(HBsAg)基因及B19病毒VP2基因,分彆重組入pGEM-T,構建齣pGEM-T-HBs及pGEM-T-VP2併測序分析;測序證實序列正確後,將pGEM-T-HBs中的HBs基因剋隆入pQE30錶達載體中,得到pQE30-HBs;再將pGEM-T-VP2中的VP2基因剋隆入pQE30-HBs中,得到pQE30-HBs-VP2後轉化至BL21(DE3)宿主菌中,併以IPTG誘導錶達融閤蛋白,以Western-blot鑒定.結果pQE30-HBs-VP2可在大腸桿菌BL21(DE3)中高效錶達,Western-blot檢測結果顯示所錶達融閤蛋白均可與抗-HBs和抗-VP2結閤反應.結論成功構建pQE30-HBs-VP2原覈錶達載體,且其錶達的重組蛋白具有良好的HBsAg和VP2蛋白的雙重抗原的反應原性.從而建立瞭錶達B19和HBV的聯閤抗原錶達繫統,同時給HBV和B19病毒重組聯閤疫苗的研製和複閤診斷試劑提供瞭抗原參攷.
목적구건을간표면항원-인미소병독B19 VP2융합단백적원핵표체계통,병검측기표체단백적항원반응성.방법용PCR확증을간표면항원(HBsAg)기인급B19병독VP2기인,분별중조입pGEM-T,구건출pGEM-T-HBs급pGEM-T-VP2병측서분석;측서증실서렬정학후,장pGEM-T-HBs중적HBs기인극륭입pQE30표체재체중,득도pQE30-HBs;재장pGEM-T-VP2중적VP2기인극륭입pQE30-HBs중,득도pQE30-HBs-VP2후전화지BL21(DE3)숙주균중,병이IPTG유도표체융합단백,이Western-blot감정.결과pQE30-HBs-VP2가재대장간균BL21(DE3)중고효표체,Western-blot검측결과현시소표체융합단백균가여항-HBs화항-VP2결합반응.결론성공구건pQE30-HBs-VP2원핵표체재체,차기표체적중조단백구유량호적HBsAg화VP2단백적쌍중항원적반응원성.종이건립료표체B19화HBV적연합항원표체계통,동시급HBV화B19병독중조연합역묘적연제화복합진단시제제공료항원삼고.
