浙江预防医学
浙江預防醫學
절강예방의학
ZHEJIANG JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2006年
6期
4-5,11
,共3页
朱函坪%姚苹苹%徐芳%翁景清%谢荣辉%李婵%赵芝雅%朱智勇
硃函坪%姚蘋蘋%徐芳%翁景清%謝榮輝%李嬋%趙芝雅%硃智勇
주함평%요평평%서방%옹경청%사영휘%리선%조지아%주지용
汉坦病毒%核蛋白基因%杆状病毒表达系统%间接免疫荧光试验
漢坦病毒%覈蛋白基因%桿狀病毒錶達繫統%間接免疫熒光試驗
한탄병독%핵단백기인%간상병독표체계통%간접면역형광시험
目的从国内生产肾综合征出血热(HFRS)疫苗Z10株中克隆汉坦病毒核蛋白基因,应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统使其在昆虫细胞中表达,制成抗原片,用于检测血清中汉坦病毒抗体.方法从汉坦病毒Z10株感染细胞上清液中提取病毒RNA,应用RT-PCR方法扩增S基因,与穿梭质粒连接并转化大肠杆菌,得到重组穿梭质粒.将其转化含杆状病毒基因组的大肠杆菌,筛选出含S基因的重组杆状病毒DNA的大肠杆菌,提取重组杆状病毒DNA转染昆虫细胞,应用ELISA法及间接免疫荧光法检测重组蛋白的抗原性.结果用RT-PCR方法扩增得到S基因,筛选出的重组杆状病毒感染细胞sf9,制成抗原片.此抗原片仅与HFRS阳性患者血清起反应,而与正常人及其它发热患者血清不起反应.检测浙江省各医院送检的97份疑似肾综合征出血热患者血清及36份正常人血清,与传统的抗原片比较,阳性符合率为100%.结论可以应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达汉坦病毒重组蛋白.以此制备的抗原片,可用于患者血清中汉坦病毒抗体检测,具有特异性强、敏感性高,试剂制备简单、安全,为诊断肾综合征出血热提供新的途径和手段.
目的從國內生產腎綜閤徵齣血熱(HFRS)疫苗Z10株中剋隆漢坦病毒覈蛋白基因,應用桿狀病毒-昆蟲細胞錶達繫統使其在昆蟲細胞中錶達,製成抗原片,用于檢測血清中漢坦病毒抗體.方法從漢坦病毒Z10株感染細胞上清液中提取病毒RNA,應用RT-PCR方法擴增S基因,與穿梭質粒連接併轉化大腸桿菌,得到重組穿梭質粒.將其轉化含桿狀病毒基因組的大腸桿菌,篩選齣含S基因的重組桿狀病毒DNA的大腸桿菌,提取重組桿狀病毒DNA轉染昆蟲細胞,應用ELISA法及間接免疫熒光法檢測重組蛋白的抗原性.結果用RT-PCR方法擴增得到S基因,篩選齣的重組桿狀病毒感染細胞sf9,製成抗原片.此抗原片僅與HFRS暘性患者血清起反應,而與正常人及其它髮熱患者血清不起反應.檢測浙江省各醫院送檢的97份疑似腎綜閤徵齣血熱患者血清及36份正常人血清,與傳統的抗原片比較,暘性符閤率為100%.結論可以應用桿狀病毒-昆蟲細胞錶達繫統錶達漢坦病毒重組蛋白.以此製備的抗原片,可用于患者血清中漢坦病毒抗體檢測,具有特異性彊、敏感性高,試劑製備簡單、安全,為診斷腎綜閤徵齣血熱提供新的途徑和手段.
목적종국내생산신종합정출혈열(HFRS)역묘Z10주중극륭한탄병독핵단백기인,응용간상병독-곤충세포표체계통사기재곤충세포중표체,제성항원편,용우검측혈청중한탄병독항체.방법종한탄병독Z10주감염세포상청액중제취병독RNA,응용RT-PCR방법확증S기인,여천사질립련접병전화대장간균,득도중조천사질립.장기전화함간상병독기인조적대장간균,사선출함S기인적중조간상병독DNA적대장간균,제취중조간상병독DNA전염곤충세포,응용ELISA법급간접면역형광법검측중조단백적항원성.결과용RT-PCR방법확증득도S기인,사선출적중조간상병독감염세포sf9,제성항원편.차항원편부여HFRS양성환자혈청기반응,이여정상인급기타발열환자혈청불기반응.검측절강성각의원송검적97빈의사신종합정출혈열환자혈청급36빈정상인혈청,여전통적항원편비교,양성부합솔위100%.결론가이응용간상병독-곤충세포표체계통표체한탄병독중조단백.이차제비적항원편,가용우환자혈청중한탄병독항체검측,구유특이성강、민감성고,시제제비간단、안전,위진단신종합정출혈열제공신적도경화수단.
