中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
11期
2087-2090
,共4页
张春来%许丹%尚小明%张宇新%姜玉凤%纪征%卢峰%姜玉如
張春來%許丹%尚小明%張宇新%薑玉鳳%紀徵%盧峰%薑玉如
장춘래%허단%상소명%장우신%강옥봉%기정%로봉%강옥여
心肌梗塞%干细胞移植%骨髓%胞间粘附分子1%血管细胞粘附分子-1
心肌梗塞%榦細胞移植%骨髓%胞間粘附分子1%血管細胞粘附分子-1
심기경새%간세포이식%골수%포간점부분자1%혈관세포점부분자-1
目的:观察骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死对血管内皮功能的影响.方法:实验于2005-09/2006-06在唐山工人医院中心实验室完成.①选用清洁级健康近交系SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、干细胞移植组、细胞培养基组,10只/组.另取1只大鼠用于骨髓间充质干细胞的提取.②大鼠处死后无菌条件下分离股骨和胫骨,剔除肌肉、骨膜,剪一侧骨端,用10 mL无血清DMEM低糖培养基冲出骨髓细胞后,收集冲洗液制成单细胞悬液,过滤离心,弃上清液,密度梯度法分离培养骨髓间充质干细胞.待细胞80%贴满培养瓶底时,用乙二胺四乙酸和胰蛋白酶混合消化传代.将4,6-二脒-2-苯基吲哚以50 mg/L浓度加入第3代细胞培养基中,制成细胞悬液备用.③术前各组大鼠均行气管插管,建立急性心肌梗死模型,以远端供血区心肌组织颜色苍白、心电图检测Ⅱ导联ST段持续抬高为模型建立成功的标志.假手术组仅开胸予以前降支穿线但不结扎.④造模成功后1～3 h,干细胞移植组用微量注射器吸取4,6-二脒-2-苯基吲哚标记好的第3代骨髓间充质干细胞悬液50 μL,直接注入梗死区边缘的心肌组织.细胞培养基组按干细胞移植组的方法于相同部位注射等量无血清DMEM低糖培养基(pH值6.9).⑤造模后4周处死各组大鼠,切取心脏组织,于梗死边缘区心肌组织制作切片,荧光显微镜下观察4,6-二脒-2-苯基吲哚标记的供体细胞.留取2 mL全血,离心后抽取血清500μL,酶联免疫吸附法测定血清中细胞间黏附分子1与血管内皮细胞黏附分子1的含量.结果:40只大鼠均进入结果分析.①体外培养骨髓间充质干细胞的性状观察:从正常大鼠骨髓中分离培养的原代骨髓间充质干细胞,24～48 h贴壁生长,短棒状;7～10 d达到80%～90%融合;传至第3代骨髓间充质干细胞分布均匀,呈纺锤形.②各组心脏标本4,6-二脒-2-苯基吲哚标记移植细胞的存活状况:干细胞移植组可见成团及散在的4,6-二脒-2-苯基吲哚标记的阳性细胞,其余3组心脏标本中均未见荧光细胞.③各组大鼠血清中细胞间黏附分子1与血管内皮细胞黏附分子1的含量检测:与假手术组比较,模型对照组、细胞培养基组、干细胞移植组细胞间黏附分子1与血管内皮细胞黏附分子1的含量均明显升高(P＜0.01或0.05);与模型对照组比较,干细胞移植组细胞间黏附分子1与血管内皮细胞黏附分子1的含量均有所降低[(3.37±0.14),(2.10±0.15)μg/L;(2.64±0.13),(1.74±0.06)μg/L;P均＜0.05].结论:骨髓间充质干细胞移植到实验性大鼠心肌梗死模型后成功存活,能降低血清中增高的细胞间黏附分子1与血管内皮细胞黏附分子1含量,提示骨髓间充质干细胞移植可能通过降低黏附分子的表达来改善血管内皮功能.
目的:觀察骨髓間充質榦細胞移植治療急性心肌梗死對血管內皮功能的影響.方法:實驗于2005-09/2006-06在唐山工人醫院中心實驗室完成.①選用清潔級健康近交繫SD大鼠40隻,隨機數字錶法分為假手術組、模型對照組、榦細胞移植組、細胞培養基組,10隻/組.另取1隻大鼠用于骨髓間充質榦細胞的提取.②大鼠處死後無菌條件下分離股骨和脛骨,剔除肌肉、骨膜,剪一側骨耑,用10 mL無血清DMEM低糖培養基遲齣骨髓細胞後,收集遲洗液製成單細胞懸液,過濾離心,棄上清液,密度梯度法分離培養骨髓間充質榦細胞.待細胞80%貼滿培養瓶底時,用乙二胺四乙痠和胰蛋白酶混閤消化傳代.將4,6-二脒-2-苯基吲哚以50 mg/L濃度加入第3代細胞培養基中,製成細胞懸液備用.③術前各組大鼠均行氣管插管,建立急性心肌梗死模型,以遠耑供血區心肌組織顏色蒼白、心電圖檢測Ⅱ導聯ST段持續抬高為模型建立成功的標誌.假手術組僅開胸予以前降支穿線但不結扎.④造模成功後1～3 h,榦細胞移植組用微量註射器吸取4,6-二脒-2-苯基吲哚標記好的第3代骨髓間充質榦細胞懸液50 μL,直接註入梗死區邊緣的心肌組織.細胞培養基組按榦細胞移植組的方法于相同部位註射等量無血清DMEM低糖培養基(pH值6.9).⑤造模後4週處死各組大鼠,切取心髒組織,于梗死邊緣區心肌組織製作切片,熒光顯微鏡下觀察4,6-二脒-2-苯基吲哚標記的供體細胞.留取2 mL全血,離心後抽取血清500μL,酶聯免疫吸附法測定血清中細胞間黏附分子1與血管內皮細胞黏附分子1的含量.結果:40隻大鼠均進入結果分析.①體外培養骨髓間充質榦細胞的性狀觀察:從正常大鼠骨髓中分離培養的原代骨髓間充質榦細胞,24～48 h貼壁生長,短棒狀;7～10 d達到80%～90%融閤;傳至第3代骨髓間充質榦細胞分佈均勻,呈紡錘形.②各組心髒標本4,6-二脒-2-苯基吲哚標記移植細胞的存活狀況:榦細胞移植組可見成糰及散在的4,6-二脒-2-苯基吲哚標記的暘性細胞,其餘3組心髒標本中均未見熒光細胞.③各組大鼠血清中細胞間黏附分子1與血管內皮細胞黏附分子1的含量檢測:與假手術組比較,模型對照組、細胞培養基組、榦細胞移植組細胞間黏附分子1與血管內皮細胞黏附分子1的含量均明顯升高(P＜0.01或0.05);與模型對照組比較,榦細胞移植組細胞間黏附分子1與血管內皮細胞黏附分子1的含量均有所降低[(3.37±0.14),(2.10±0.15)μg/L;(2.64±0.13),(1.74±0.06)μg/L;P均＜0.05].結論:骨髓間充質榦細胞移植到實驗性大鼠心肌梗死模型後成功存活,能降低血清中增高的細胞間黏附分子1與血管內皮細胞黏附分子1含量,提示骨髓間充質榦細胞移植可能通過降低黏附分子的錶達來改善血管內皮功能.
목적:관찰골수간충질간세포이식치료급성심기경사대혈관내피공능적영향.방법:실험우2005-09/2006-06재당산공인의원중심실험실완성.①선용청길급건강근교계SD대서40지,수궤수자표법분위가수술조、모형대조조、간세포이식조、세포배양기조,10지/조.령취1지대서용우골수간충질간세포적제취.②대서처사후무균조건하분리고골화경골,척제기육、골막,전일측골단,용10 mL무혈청DMEM저당배양기충출골수세포후,수집충세액제성단세포현액,과려리심,기상청액,밀도제도법분리배양골수간충질간세포.대세포80%첩만배양병저시,용을이알사을산화이단백매혼합소화전대.장4,6-이미-2-분기신타이50 mg/L농도가입제3대세포배양기중,제성세포현액비용.③술전각조대서균행기관삽관,건립급성심기경사모형,이원단공혈구심기조직안색창백、심전도검측Ⅱ도련ST단지속태고위모형건립성공적표지.가수술조부개흉여이전강지천선단불결찰.④조모성공후1～3 h,간세포이식조용미량주사기흡취4,6-이미-2-분기신타표기호적제3대골수간충질간세포현액50 μL,직접주입경사구변연적심기조직.세포배양기조안간세포이식조적방법우상동부위주사등량무혈청DMEM저당배양기(pH치6.9).⑤조모후4주처사각조대서,절취심장조직,우경사변연구심기조직제작절편,형광현미경하관찰4,6-이미-2-분기신타표기적공체세포.류취2 mL전혈,리심후추취혈청500μL,매련면역흡부법측정혈청중세포간점부분자1여혈관내피세포점부분자1적함량.결과:40지대서균진입결과분석.①체외배양골수간충질간세포적성상관찰:종정상대서골수중분리배양적원대골수간충질간세포,24～48 h첩벽생장,단봉상;7～10 d체도80%～90%융합;전지제3대골수간충질간세포분포균균,정방추형.②각조심장표본4,6-이미-2-분기신타표기이식세포적존활상황:간세포이식조가견성단급산재적4,6-이미-2-분기신타표기적양성세포,기여3조심장표본중균미견형광세포.③각조대서혈청중세포간점부분자1여혈관내피세포점부분자1적함량검측:여가수술조비교,모형대조조、세포배양기조、간세포이식조세포간점부분자1여혈관내피세포점부분자1적함량균명현승고(P＜0.01혹0.05);여모형대조조비교,간세포이식조세포간점부분자1여혈관내피세포점부분자1적함량균유소강저[(3.37±0.14),(2.10±0.15)μg/L;(2.64±0.13),(1.74±0.06)μg/L;P균＜0.05].결론:골수간충질간세포이식도실험성대서심기경사모형후성공존활,능강저혈청중증고적세포간점부분자1여혈관내피세포점부분자1함량,제시골수간충질간세포이식가능통과강저점부분자적표체래개선혈관내피공능.
