科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2008年
12期
3119-3123
,共5页
李英辉%赵亚%刘忠湘%毛张翔%黄豫晓%薛采芳
李英輝%趙亞%劉忠湘%毛張翔%黃豫曉%薛採芳
리영휘%조아%류충상%모장상%황예효%설채방
HIV-1%复合多表位基因%原核表达%多克隆抗体
HIV-1%複閤多錶位基因%原覈錶達%多剋隆抗體
HIV-1%복합다표위기인%원핵표체%다극륭항체
为表达HIV-1复合多表位基因并制备其多克隆抗体.设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌.将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET32a并诱导表达.采用Ni2+-NTA亲和柱纯化目的蛋白,以p24抗体对纯化蛋白进行Western-blot分析.将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.通过PCR成功获得长度为651 bp的HIV-1的p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG基因,通过诱导表达,显示在相对分子量约45 000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白.经此纯化的融合蛋白免疫的家兔能产生特异性抗体,其滴度达到1:3 200.纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型HIV疫苗奠定一定的理论和实践基础.
為錶達HIV-1複閤多錶位基因併製備其多剋隆抗體.設計引物,以HIV-1標準株全長cDNA序列為模闆,PCR擴增穫得p24基因片段;閤成改造後的多箇錶位基因MEG併且與p24片段相連接,剋隆入大腸桿菌.將測序正確的p24MEG基因剋隆入原覈錶達載體pET32a併誘導錶達.採用Ni2+-NTA親和柱純化目的蛋白,以p24抗體對純化蛋白進行Western-blot分析.將純化的融閤蛋白免疫傢兔製備多剋隆抗體.通過PCR成功穫得長度為651 bp的HIV-1的p24片段,穫得瞭與多錶位基因連接後的p24MEG基因,通過誘導錶達,顯示在相對分子量約45 000處有預計大小的特異性條帶,錶明成功錶達齣融閤蛋白.經此純化的融閤蛋白免疫的傢兔能產生特異性抗體,其滴度達到1:3 200.純化的融閤蛋白和多剋隆抗體為研究新型HIV疫苗奠定一定的理論和實踐基礎.
위표체HIV-1복합다표위기인병제비기다극륭항체.설계인물,이HIV-1표준주전장cDNA서렬위모판,PCR확증획득p24기인편단;합성개조후적다개표위기인MEG병차여p24편단상련접,극륭입대장간균.장측서정학적p24MEG기인극륭입원핵표체재체pET32a병유도표체.채용Ni2+-NTA친화주순화목적단백,이p24항체대순화단백진행Western-blot분석.장순화적융합단백면역가토제비다극륭항체.통과PCR성공획득장도위651 bp적HIV-1적p24편단,획득료여다표위기인련접후적p24MEG기인,통과유도표체,현시재상대분자량약45 000처유예계대소적특이성조대,표명성공표체출융합단백.경차순화적융합단백면역적가토능산생특이성항체,기적도체도1:3 200.순화적융합단백화다극륭항체위연구신형HIV역묘전정일정적이론화실천기출.
