中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
23期
4457-4461
,共5页
吕红兵%王捍国%吴甘茶%闫福华
呂紅兵%王捍國%吳甘茶%閆福華
려홍병%왕한국%오감다%염복화
颅神经嵴干细胞%永生化%转染%端粒酶催化亚基
顱神經嵴榦細胞%永生化%轉染%耑粒酶催化亞基
로신경척간세포%영생화%전염%단립매최화아기
背景:颅神经嵴干细胞可以作为颌面部各种组织和器官分化研究的重要细胞来源,如何使其获得永生化具有重要意义.人类细胞自发永生化的频率非常低,而一些永生化的基因可以显著增加这种频率.目的:观察人端粒酶催化亚基基因在大鼠颅神经嵴干细胞永生化过程中的作用.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-09/2008-06在解放军第四军医大学完成.材料:选择清洁级孕8.5 d SD大鼠3只,6周,体质量180 g:先天性细胞免疫缺陷动物雄性Balb/c裸小鼠,体质量18～21 g,均由解放军第四军医大学实验动物中心提供.质粒PCIneo-hTERT由解放军第四军医大学口腔医院牙体牙髓科提供.方法:原代培养大鼠颅神经嵴干细胞后,将含有人端粒酶催化亚基基因的质粒PCIneo-hTERT转入大鼠颅神经嵴干细胞.经G418筛选后扩增,并连续培养.采用免疫细胞化学法观察转染细胞内人端粒酶催化亚基基因和颅神经嵴干细胞的特异标志物P75的表达,检测细胞的端粒酶活性,绘制细胞生长曲线观察其增殖能力,并通过裸鼠移植实验了解转染细胞的特性.主要观察指标:细胞克隆、特异性蛋白P75表达、端粒酶活性、增殖能力及致瘤性实验结果.结果:①质粒PCIneo-hTERT转染细胞后24 h,有少量细胞死亡.加G418后48 h,细胞逐步开始大量死亡.12 d后出现抗性细胞克隆,共有3个细胞克隆生长良好.分别命名为克隆1、2、3.克隆1和克隆2经过20～25代的传代后,细胞发生衰老、死亡;而克隆3在体外长期培养条件下生长状态良好,稳定表达人端粒酶催化亚基和P75.经转染后颅神经嵴干细胞的端粒酶活性明显升高,且能持续表达.②人端粒酶催化亚基基因转染后,3个细胞克隆在初期的增殖能力较强,随后克隆1、2的增殖速度逐渐变慢,出现死亡,克隆3越过衰老期,且无致瘤性.结论:人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞后,细胞得以永生化,其表型稳定,可作为颅颌面部细胞分化和组织工程研究的种子细胞.
揹景:顱神經嵴榦細胞可以作為頜麵部各種組織和器官分化研究的重要細胞來源,如何使其穫得永生化具有重要意義.人類細胞自髮永生化的頻率非常低,而一些永生化的基因可以顯著增加這種頻率.目的:觀察人耑粒酶催化亞基基因在大鼠顱神經嵴榦細胞永生化過程中的作用.設計、時間及地點:觀察性實驗,于2007-09/2008-06在解放軍第四軍醫大學完成.材料:選擇清潔級孕8.5 d SD大鼠3隻,6週,體質量180 g:先天性細胞免疫缺陷動物雄性Balb/c裸小鼠,體質量18～21 g,均由解放軍第四軍醫大學實驗動物中心提供.質粒PCIneo-hTERT由解放軍第四軍醫大學口腔醫院牙體牙髓科提供.方法:原代培養大鼠顱神經嵴榦細胞後,將含有人耑粒酶催化亞基基因的質粒PCIneo-hTERT轉入大鼠顱神經嵴榦細胞.經G418篩選後擴增,併連續培養.採用免疫細胞化學法觀察轉染細胞內人耑粒酶催化亞基基因和顱神經嵴榦細胞的特異標誌物P75的錶達,檢測細胞的耑粒酶活性,繪製細胞生長麯線觀察其增殖能力,併通過裸鼠移植實驗瞭解轉染細胞的特性.主要觀察指標:細胞剋隆、特異性蛋白P75錶達、耑粒酶活性、增殖能力及緻瘤性實驗結果.結果:①質粒PCIneo-hTERT轉染細胞後24 h,有少量細胞死亡.加G418後48 h,細胞逐步開始大量死亡.12 d後齣現抗性細胞剋隆,共有3箇細胞剋隆生長良好.分彆命名為剋隆1、2、3.剋隆1和剋隆2經過20～25代的傳代後,細胞髮生衰老、死亡;而剋隆3在體外長期培養條件下生長狀態良好,穩定錶達人耑粒酶催化亞基和P75.經轉染後顱神經嵴榦細胞的耑粒酶活性明顯升高,且能持續錶達.②人耑粒酶催化亞基基因轉染後,3箇細胞剋隆在初期的增殖能力較彊,隨後剋隆1、2的增殖速度逐漸變慢,齣現死亡,剋隆3越過衰老期,且無緻瘤性.結論:人耑粒酶催化亞基基因轉染大鼠顱神經嵴榦細胞後,細胞得以永生化,其錶型穩定,可作為顱頜麵部細胞分化和組織工程研究的種子細胞.
배경:로신경척간세포가이작위합면부각충조직화기관분화연구적중요세포래원,여하사기획득영생화구유중요의의.인류세포자발영생화적빈솔비상저,이일사영생화적기인가이현저증가저충빈솔.목적:관찰인단립매최화아기기인재대서로신경척간세포영생화과정중적작용.설계、시간급지점:관찰성실험,우2007-09/2008-06재해방군제사군의대학완성.재료:선택청길급잉8.5 d SD대서3지,6주,체질량180 g:선천성세포면역결함동물웅성Balb/c라소서,체질량18～21 g,균유해방군제사군의대학실험동물중심제공.질립PCIneo-hTERT유해방군제사군의대학구강의원아체아수과제공.방법:원대배양대서로신경척간세포후,장함유인단립매최화아기기인적질립PCIneo-hTERT전입대서로신경척간세포.경G418사선후확증,병련속배양.채용면역세포화학법관찰전염세포내인단립매최화아기기인화로신경척간세포적특이표지물P75적표체,검측세포적단립매활성,회제세포생장곡선관찰기증식능력,병통과라서이식실험료해전염세포적특성.주요관찰지표:세포극륭、특이성단백P75표체、단립매활성、증식능력급치류성실험결과.결과:①질립PCIneo-hTERT전염세포후24 h,유소량세포사망.가G418후48 h,세포축보개시대량사망.12 d후출현항성세포극륭,공유3개세포극륭생장량호.분별명명위극륭1、2、3.극륭1화극륭2경과20～25대적전대후,세포발생쇠로、사망;이극륭3재체외장기배양조건하생장상태량호,은정표체인단립매최화아기화P75.경전염후로신경척간세포적단립매활성명현승고,차능지속표체.②인단립매최화아기기인전염후,3개세포극륭재초기적증식능력교강,수후극륭1、2적증식속도축점변만,출현사망,극륭3월과쇠로기,차무치류성.결론:인단립매최화아기기인전염대서로신경척간세포후,세포득이영생화,기표형은정,가작위로합면부세포분화화조직공정연구적충자세포.
