甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
2期
1-5
,共5页
董春娜%李刚%李伟%张坤%史利军%哈小琴%胡永浩
董春娜%李剛%李偉%張坤%史利軍%哈小琴%鬍永浩
동춘나%리강%리위%장곤%사리군%합소금%호영호
减蛋综合征病毒%环介导等温扩增%检测
減蛋綜閤徵病毒%環介導等溫擴增%檢測
감단종합정병독%배개도등온확증%검측
根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μm01·L-1,内引物浓度0.8 μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 rmmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测.
根據GenBank登錄的減蛋綜閤徵病毒(EDSV)六鄰體基因的保守區,設計瞭3對環介導等溫基因擴增(LAMP)引物,優化反應體繫,併對其靈敏性、特異性進行驗證.結果錶明:LAMP優化後的反應體繫為外引物濃度0.1μm01·L-1,內引物濃度0.8 μmol·L-1,環引物濃度0.4μmol·L-1,Mg2+濃度8.0 mmol·L-1,dNTP濃度0.8 mmol·L-1,甜菜堿濃度0.5 rmmol·L-1,BstDNA聚閤酶濃度8 U,最佳反應溫度65℃;擴增齣的EDSV基因呈特徵性梯狀條帶,顯色反應呈綠色熒光;檢測EDSV的靈敏度高,是普通PCR檢測的10倍,可檢測到60箇拷貝的基因組DNA;特異性彊,與鷄新城疫病毒(NDV)、傳染性法氏囊病毒(IBDV)、傳染性支氣管炎病毒(IBV)、鷄胚緻死孤兒病毒(CELO)無交扠反應;該方法重複性好,穩定性高,可準確快速地進行減蛋綜閤徵病毒的檢測.
근거GenBank등록적감단종합정병독(EDSV)륙린체기인적보수구,설계료3대배개도등온기인확증(LAMP)인물,우화반응체계,병대기령민성、특이성진행험증.결과표명:LAMP우화후적반응체계위외인물농도0.1μm01·L-1,내인물농도0.8 μmol·L-1,배인물농도0.4μmol·L-1,Mg2+농도8.0 mmol·L-1,dNTP농도0.8 mmol·L-1,첨채감농도0.5 rmmol·L-1,BstDNA취합매농도8 U,최가반응온도65℃;확증출적EDSV기인정특정성제상조대,현색반응정록색형광;검측EDSV적령민도고,시보통PCR검측적10배,가검측도60개고패적기인조DNA;특이성강,여계신성역병독(NDV)、전염성법씨낭병독(IBDV)、전염성지기관염병독(IBV)、계배치사고인병독(CELO)무교차반응;해방법중복성호,은정성고,가준학쾌속지진행감단종합정병독적검측.
