CAJ | 학술논문

目的:探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化.方法:利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA;MTT法检测rVvhA 对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测rVvhA诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡情况;Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜观察rVvhA诱导Jurkat T细胞核形态的改变;分光光度法检测凋亡过程中Caspase- 3酶活性的变化.结果:纯化复性后rVvhA的纯度达到92%以上;MTT结果显示rVvhA活性蛋白能显著抑制Jurkat T淋巴细胞的生长,有效浓度为1.5 HU/mL;流式细胞仪和激光共聚焦检测发现rVvhA作用后Jurkat T淋巴细胞核固缩,产生亮蓝荧光,1.5 HU/mL rVvhA,作用4 h后即可有效诱导其凋亡,凋亡率为(39.13±3.33)%,对照组为(3.43±0.34)%,且能被Caspase全酶抑制剂一定程度抑制.1.5 HU/mL rVvhA作用Jurkat T淋巴细胞3 h,Caspase-3酶活性达到高峰.结论:rVvhA能损伤人Jurkat T淋巴细胞,诱导其发生细胞凋亡,Caspase-3可能在rVvhA诱导的Jurkat T细胞凋亡过程中起重要作用.
목적:탐토창상호균용세포소융합단백(rVvhA)대인Jurkat T림파세포조망적작용급조망과정중Caspase-3매활성적변화.방법:이용기인공정방법체외표체、제비화순화rVvhA;MTT법검측rVvhA 대Jurkat T림파세포적세포독활성영향;Annexin-V/PI쌍염류식세포의검측rVvhA유도Jurkat T림파세포조망정황;Hochest33258형광염색격광공취초현미경관찰rVvhA유도Jurkat T세포핵형태적개변;분광광도법검측조망과정중Caspase- 3매활성적변화.결과:순화복성후rVvhA적순도체도92%이상;MTT결과현시rVvhA활성단백능현저억제Jurkat T림파세포적생장,유효농도위1.5 HU/mL;류식세포의화격광공취초검측발현rVvhA작용후Jurkat T림파세포핵고축,산생량람형광,1.5 HU/mL rVvhA,작용4 h후즉가유효유도기조망,조망솔위(39.13±3.33)%,대조조위(3.43±0.34)%,차능피Caspase전매억제제일정정도억제.1.5 HU/mL rVvhA작용Jurkat T림파세포3 h,Caspase-3매활성체도고봉.결론:rVvhA능손상인Jurkat T림파세포,유도기발생세포조망,Caspase-3가능재rVvhA유도적Jurkat T세포조망과정중기중요작용.