CAJ | 학술논문

目的从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础.方法以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(nucleoprotein,NP)为目的蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析.结果经过3轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300、302和935 bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同.结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息.
목적 종인원화서균체항체고(human single fold scFv libraries I+J)중사선도능고친화성、특이결합인금류감병독H5N1적단련항체,위건립H5N1쾌속사사시제화인원화치료단항전정기출.방법 이H5N1병독적혈응소(hemagglutitin,HA)단백화핵단백(nucleoprotein,NP)위목적 단백,대상술단항서균체문고이친화성위원리진행사선,경과3륜사선부집후,수궤도선료96개서균체극륭확증배양,ELISA법도선능특이성、고친화성결합목적 단백적서균체극륭,병환용HB2151숙주균대양성단련항체극륭진행가용성표체,ELISA법감정가용성단련항체적결합활성,PCR확증양성극륭적경、중련기인편단,병대양성단련항체분자측서화서렬분석.결과 경과3륜사선,분별종96개서균체극륭중도선도료량주능특이결합NP단백、3주능특이결합HA단백적단련항체,PCR확증도득도료장위300、302화935 bp적경련、중련화경련-련접편단-중련적기인편단,측서결과분석발현상술5조단련항체편단재경련적47、49、50、51、53、54、56、96、97、98화99위적안기산조성불동,이특이결합NP단백적단련재중련구역안기산조성완전상동,이특이결합HA단백적단련재중련적44、47、85、86、87、88화89위안기산조성불동.결론 종서균체항체고중사선도적특이결합HA화NP단백적단련항체편단,가위진일보연발H5N1쾌속사선시제화인원성치료항체전정기출,야가위감정HA화NP단백중적항원결정족제공결구신식.