CAJ | 학술논문

目的为了研究G3BP(Ras-GAP SH3-binding protein)的功能及作用机制,采用原核表达G3BP蛋白诱导免疫,制备抗G3BP单克隆抗体,并检测G3BP在临床常见肿瘤中的表达情况.方法采用原核表达载体pGEX-5X1,通过IPTG诱导,使用大肠杆菌BL21,高质量表达GST-G3BP融合蛋白.将纯化后的原核表达蛋白注射BALB/c小鼠诱导产生免疫应答,采用经典杂交瘤技术制备单克隆抗体,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色ABC法进行抗体鉴定和肿瘤检测.结果筛选出分泌抗G3BP抗体的单克隆杂交瘤细胞,免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1,蛋白免疫印迹及抗原竞争抑制实验表明该抗体是特异性抗G3BP抗体.石蜡切片免疫组织化学法检测临床标本,在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等临床肿瘤活检标本中检出G3BP表达明显增高.在乳腺癌临床组织标本中,G3BP表达水平与c-erbB2表达正相关,与淋巴结转移正相关. 结论成功制备了抗人G3BP单克隆抗体,所得到的特异性G3BP单克隆抗体能够应用于ELISA、Western蛋白免疫印迹以及免疫组织化学染色对不同样本的G3BP表达水平进行检测.G3BP在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中表达明显增高.G3BP有可能作为肿瘤标志物辅助对乳腺癌预后的判断.
목적위료연구G3BP(Ras-GAP SH3-binding protein)적공능급작용궤제,채용원핵표체G3BP단백유도면역,제비항G3BP단극륭항체,병검측G3BP재림상상견종류중적표체정황.방법채용원핵표체재체pGEX-5X1,통과IPTG유도,사용대장간균BL21,고질량표체GST-G3BP융합단백.장순화후적원핵표체단백주사BALB/c소서유도산생면역응답,채용경전잡교류기술제비단극륭항체,병응용매련면역흡부시험(ELISA)、단백면역인적화면역조직화학염색ABC법진행항체감정화종류검측.결과사선출분비항G3BP항체적단극륭잡교류세포,면역구단백아류감정위IgG1,단백면역인적급항원경쟁억제실험표명해항체시특이성항G3BP항체.석사절편면역조직화학법검측림상표본,재폐암、결장암、위암、유선암등림상종류활검표본중검출G3BP표체명현증고.재유선암림상조직표본중,G3BP표체수평여c-erbB2표체정상관,여림파결전이정상관. 결론성공제비료항인G3BP단극륭항체,소득도적특이성G3BP단극륭항체능구응용우ELISA、Western단백면역인적이급면역조직화학염색대불동양본적G3BP표체수평진행검측.G3BP재폐암、결장암、위암、유선암등종류중표체명현증고.G3BP유가능작위종류표지물보조대유선암예후적판단.